[发明专利]一种黑骨藤有效部位群的HPLC指纹图建立方法

权利要求书

1.一种黑骨藤有效部位群的HPLC指纹图建立方法，其特征在于：包括以下步骤：

(1)混合对照品溶液的制备：取新绿原酸、绿原酸、隐绿原酸和异绿原酸C标准品，用甲醇定容为新绿原酸、绿原酸、隐绿原酸和异绿原酸C浓度均为0.005-0.015mg·mL^-1混合对照品溶液；

(2)供试品溶液这样制备：精密称定黑骨藤粗粉100.0g，用70％乙醇回流提取三次，加入的乙醇量分别为8倍、8倍、6倍，提取时间分别为1.5h、1.5h、1.0h，将三次滤液合并，抽滤，浓缩至180-220mL，用蒸馏水定容至1000mL，得样品溶液；精密称取100gD101大孔吸附树脂装入层析柱，蒸馏水冲洗至层析柱下端流出液体清澈无色后，将1000mL样品溶液上样进行吸附，待吸附完全后以1200mL蒸馏水洗脱，然后以2500mL70％乙醇洗脱，收集层析柱流出的70％乙醇部分，浓缩，烘干，研磨，得黑骨藤有效部位群粉末；精密称取黑骨藤有效部位群粉末50.0mg，用70％甲醇定容至10mL，过0.45μm微孔滤膜，取续滤液，得供试品溶液；

(3)指纹图谱的制作：色谱条件：色谱柱：XtimateC18，4.6×250mm，5μm；流动相：乙腈为A相，0.1％磷酸水溶液为B相；梯度洗脱，检测波长为360nm，流速为1mL·min^-1，柱温38℃，进样量10μL；记录色谱图得到黑骨藤有效部位群的HPLC指纹图谱；所述的梯度洗脱程序是：0～15min，11％→11％A；15～30min，11％→18％A；30～40min，18％→18％A；40～50min，18％→23％A；50～60min，23％→25％A；60～85min，25％→32％A；

(4)标准指纹谱图的确认：按照上述提供的方法，对多批次黑骨藤有效部位群建立了HPLC指纹图谱，通过分析比较确定了24个共有峰，这些共有峰构成了黑骨藤有效部位群的指纹特征，作为黑骨藤有效部位群的标准指纹图谱。

2.如权利要求1所述的黑骨藤有效部位群的HPLC指纹图建立方法，其特征在于：所述混合对照品溶液这样制备：取新绿原酸、绿原酸、隐绿原酸和异绿原酸C标准品，用甲醇定容为新绿原酸、绿原酸、隐绿原酸和异绿原酸C浓度均为0.01mg·mL^-1混合对照品溶液。

3.如权利要求1所述的黑骨藤有效部位群的HPLC指纹图建立方法，其特征在于：所述24个共有峰，以3号峰绿原酸为参照峰，其相对保留时间分别为0.570、0.595、1.000、1.110、1.587、1.851、1.981、2.117、2.177、2.436、2.561、2.720、3.317、4.092、4.277、4.360、4.443、4.580、4.844、4.886、5.730、5.879、6.169、6.424。