[发明专利]一种利用联合法从胎盘绒毛膜中提取间充质干细胞的方法

摘要

本发明公开了一种利用联合法从胎盘绒毛膜中提取间充质干细胞的方法，包括胎盘预处理后，将胎盘绒毛膜组织通过部分消化法进行初步分解，再利用部分消化后的松散产物通过组织接种的方式，通过培养制备得到胎盘多能干细胞的步骤；然后再将原代细胞进行传代培养并收集的步骤；最后进行程序降温冻存，将温度降至‑80℃后取出样本，转移至液氮罐中长期保存，优点是快速收获较多的均一、稳定的原代细胞，并能够持续传代，不仅具有较高的克隆形成能力，还能够稳定的表达胎盘间充质表面标记。

主权项

1.一种利用联合法从胎盘绒毛膜中提取间充质干细胞的方法，其特征在于，包括以下步骤：步骤一、选取胎盘，并对胎盘进行检测，确保病毒检测结果全阴性；剪取胎盘上新鲜的绒毛膜样品组织；步骤二、将剪取获得的样品组织置于磷酸缓冲盐溶液中进行清洗；步骤三、挑取颜色鲜艳的清洗好的样品组织，去除可见大血管、残余胎盘隔组织，再将样品组织剪成样品组织碎片；步骤四、在样品组织碎片中加入消化液，并进行摇晃消化；待消化进行到30％‑70％时，再通过培养液终止，获得其中松散的组织块；步骤五、将松散的组织块平铺接种于培养容器中，静置；步骤六、待培养容器中的组织块的周围干燥后，加入培养液，以使得组织块与培养液充分接触，再将其放入到培养箱中进行培养；步骤七、待组织块周围细胞形成密集集落时，进行传代培养；步骤八、传代培养完成后，采用磷酸缓冲盐溶液进行清洗，再重组消化酶或胰酶消化后，待细胞变圆、脱落，停止消化，终止后收集细胞悬液；将细胞悬液去上清，将细胞沉淀重悬，按每皿不低于2.0×105个细胞接种于平皿中；步骤九、待细胞长至80‑90％密度时，获得间充质干细胞，进行冻存。