[发明专利]一种大豆灰斑病病原菌快速大量产孢的培养方法

摘要

本发明涉及一种大豆灰斑病病原菌快速大量产孢的培养方法，属于植物病原菌诱导产孢技术领域，首先配制产孢培养基，主要成分为V8蔬菜汁，碳酸钙，琼脂粉，25％乳酸和超纯水，然后将活化好的大豆灰斑病病原菌接种于培养基上，25‑28℃恒温培养箱暗培养8‑14天，再用无菌水洗脱分生孢子，显微镜下计量孢子数；本发明大大提高了大豆灰斑病病原菌产孢效率，具有菌落生长快，产孢量大，致病力持久，操作简单，稳定性好等优点，缩短了大豆灰斑病抗性品种鉴定周期，节约了人力物力，具有较高的应用价值，并为大豆灰斑病病害发生规律和防控手段的深入研究提供科学、有效的技术支撑。

主权项

1.一种大豆灰斑病病原菌快速大量产孢的培养方法，其特征在于，包括以下操作步骤：1)病原菌菌种的活化：采用常规的组织分离法将大豆灰斑病病原菌进行单孢分离，取分离得到的大豆灰斑病病原菌保存于4℃冰箱备用，待使用时，取出置于32‑35℃酒精浴槽中轻微晃动60s，然后将菌丝块与适量的无菌水研磨制成菌丝悬浮液，再在菌种活化培养基上加入0.2‑0.25mL菌丝悬浮液，用曲玻棒涂抹均匀，活化培养，得病原菌备用；2)产孢培养基的制备：取V8蔬菜汁，向其中加入适量碳酸钙混合溶解，将得到的V8蔬菜汁碳酸钙溶液以4000r/min离心10min，取上清液，然后加入超纯水定容至1000mL，再向其中加入琼脂粉，将其在高压灭菌锅内灭菌20min，取出冷却后在超净台内将其分装在培养皿中，同时每个培养皿加入25wt％乳酸，即得产孢培养基；3)病原菌接种：取已经活化好的病原菌接种于产孢培养基上，然后放入25‑28℃恒温培养箱中，黑暗条件下培养8‑14天；4)洗孢计数：在产孢培养皿中倒入适量无菌水，轻磨菌落，洗下分生孢子，用无菌纱布过滤后在显微镜下计量孢子数。