[发明专利]靶向/免疫调节性融合蛋白及其制造方法

摘要

本发明涉及靶向/免疫调节性融合蛋白及其制造方法，总的来说涉及产生在癌症疗法中使用的融合蛋白的领域，更具体来说，涉及编码所述融合蛋白的核苷酸序列，其中所述嵌合融合蛋白包含至少一个靶向组成部分和至少一个抵消癌细胞的免疫耐受性的免疫调节组成部分。

主权项

1.一种制备治疗活性抗体‑肽融合蛋白的方法，所述方法包括：制备所述抗体‑肽融合蛋白的密码子优化的核苷酸序列，其中所述密码子优化的核苷酸序列包含CG序列的增加，其中所述抗体‑肽融合蛋白包含靶向组成部分和免疫调节组成部分，其中所述靶向组成部分和所述免疫调节组成部分通过选自SEQ ID NO：3或SEQ ID NO：11的氨基酸间隔物相连，其中所述免疫调节组成部分是包含SEQ ID NO：4的氨基酸序列的TGF‑βRII；其中所述靶向组成部分选自：由重链SEQ ID NO：5和轻链SEQ ID NO：6构成的抗EGFR1抗体、由重链SEQ ID NO：1和轻链SEQ ID NO：2构成的抗HER2/Neu抗体、以及由重链SEQ ID NO：7和轻链SEQ ID NO：8构成的抗CTLA4抗体，其中SEQ ID NO：4通过氨基酸间隔物连接至抗HER2/Neu抗体的SEQ ID NO：1或SEQ ID NO：2的C‑端、抗EGFR1抗体的SEQ ID NO：5或SEQ ID NO：6的C‑端、抗CTLA‑4抗体的SEQ ID NO：7或SEQ ID NO：8的C‑端；将所述抗体‑肽融合蛋白的优化的序列克隆到能够瞬时或持续表达的中华仓鼠卵巢(CHO)宿主细胞中；在发酵培养基中在适合生长的条件下生长CHO宿主细胞并允许所述CHO宿主细胞表达克隆的蛋白，其中所述发酵培养基包含二价过渡金属盐；以及对表达的抗体‑肽融合蛋白进行纯化，并任选地检查所述抗体‑肽融合蛋白对其靶的双特异性结合能力。