[发明专利]一种金银花中绿原酸和总黄酮的联合提取分离纯化方法

摘要

本发明公开了一种金银花中绿原酸和总黄酮的联合提取分离纯化方法，包括如下步骤：S01，微波辅助浸润：取干燥至恒重的适量金银花药材并放入烧杯中，加入相当于金银花药材80~100倍量的去离子水，室温搅拌浸泡至少1h后，放入微波萃取机中，微波萃取温度为50~60℃，微波萃取功率为400~500W，微波萃取时间为10~30min。本发明的工艺适合金银花中绿原酸和总黄酮的联合提取、分离、纯化，并且绿原酸单体结晶纯度高达75%以上，进一步精制后可达98%以上，整个工艺的操作步骤简单易行，收率高，成本低。

主权项

1.一种金银花中绿原酸和总黄酮的联合提取分离纯化方法，其特征在于，包括如下步骤：S01，微波辅助浸润：取干燥至恒重的适量金银花药材并放入烧杯中，加入相当于金银花药材80~100倍量的去离子水，室温搅拌浸泡至少1h后，放入微波萃取机中，微波萃取温度为50~60℃，微波萃取功率为400~500W，微波萃取时间为10~30min；S02，水热法‑酸法联合提取金银花中的绿原酸和总黄酮：在S01经微波辅助浸润的烧杯中加入弱酸性缓冲溶液体系，调节浸润液的pH值为5.5~6，将烧杯中的浸润液及金银花药材倒入高压反应釜中，设定反应温度为160~200℃，反应时间为10~30min；一次提取完毕后，放出一次提取液，取相当于金银花药材干重40~60倍量的去离子水，并在去离子水中加入弱酸性缓冲溶液体系，调节去离子水的pH值为5.5~6，再将调节好pH值的去离子水加入高压反应釜中，进行二次提取，二次提取的反应温度为130~150℃，反应时间为10~15min，反应完毕后，放出二次提取液，合并一次提取液和二次提取液，离心后取上清液，上清液浓缩至金银花药材干重的2~3倍量后，停止浓缩，得提取浓缩液；S03，醇沉：取提取浓缩液，加入纯乙醇进行醇沉，纯乙醇的加入量为提取浓缩液的3~4倍量，边加边搅拌，纯乙醇滴加完毕后，室温静置至少10h后，过滤，取滤液一，滤液一浓缩至无醇味后，再次过滤，得滤液二；S04，萃取除杂：滤液二先用石油醚萃取至少2次，再用乙酸乙酯萃取至少2次，弃去石油醚层和乙酸乙酯层，取水层；S05，过层析柱分离绿原酸和总黄酮：水层挥发至无有机溶剂味道后，过强极性大孔吸附树脂柱，30~40%乙醇洗脱4~6个柱体积得绿原酸有效部位，60~80%乙醇洗脱3~5个柱体积得总黄酮有效部位；S06，绿原酸的精制：取30~40%乙醇洗脱部位，过滤后干燥，干燥品用乙醇溶解，乙醇的加入量相当于干燥品的3~5倍量，干燥品与乙醇的比例为重量体积比，滤过，滤液中加入1~2滴氨水后搅拌均匀，再逐滴加入相当于乙醇10~30倍量的乙酸乙酯，边加边搅拌，滴加完毕后将重结晶溶液置于‑10~0℃的冰箱后，过夜后取出，析出结晶，过滤，结晶洗涤至中性，干燥，得绿原酸单体结晶；S07，总黄酮的精制：取60~80%乙醇洗脱部位，过滤后浓缩，浓缩至无醇味后，在浓缩液中加入活性炭吸附颗粒，磁力搅拌至少3h后，过滤，滤液浓缩后干燥，得金银花总黄酮。