[发明专利]一种椰子未成熟花序组织培养方法

摘要

本发明公开了一种椰子未成熟花序组织培养方法，以椰子未成熟花序为外植体，在组培各阶段严格控制培养基配方，经组织培养，愈伤诱导率最高可达到97.2％，体胚诱导率最高可达到98.0％，体胚再生率最高可达到99.1％，移栽成活率最高可达到97.5％。本发明培养基配方和方法更为广谱，适用于海南本地高种、文椰2号、文椰3号等多个品种，且重复性好、周期短，有利于工厂化、商业化推广应用。

主权项

1.一种椰子未成熟花序组织培养方法，其特征在于，包括以下步骤：(1)外植体的选择：未成熟花序；(2)依次采用愈伤诱导培养基、愈伤扩繁培养基、体胚诱导培养基、体胚成熟培养基、体胚萌发培养基、再生植株壮根培养基和组培苗移栽培养基进行培养；其中，愈伤诱导培养基包括以下成分：在改良Y3培养基中添加200～300μM 2,4‑D、3～8μM BAP、3～8μM 2iP、2～8g/L植物凝胶、1～8g/L活性炭和20～40g/L蔗糖；愈伤扩繁培养基包括以下成分：在改良Y3培养基中添加200～300μM 2,4‑D、3～8μM BAP、3～8μM 2iP、5～20μМ TDZ、2～8g/L植物凝胶、1～8g/L活性炭和20～40g/L蔗糖；改良Y3培养基为在Y3培养基的基础上对以下成分的含量进行调整：硫酸亚铁30～50mg/L，钠螯合物40～60mg/L，盐酸吡多醇、盐酸硫胺素、烟酸、泛酸钙、生物素和叶酸的含量均为0.03～0.08mg/L，甘氨酸0.05～2mg/L，不含肌醇、L‑谷氨酰胺、L‑精氨酸和L‑天冬酰胺；体胚诱导培养基包括以下成分：在WPM培养基中添加20～30μM 2,4‑D、3～8μM BAP、3～8μM 2iP、2～8g/L植物凝胶、1～8g/L活性炭和20～40g/L蔗糖；体胚成熟培养基包括以下成分：在WPM培养基中添加2～8g/L植物凝胶、1～8g/L活性炭和20～40g/L蔗糖；体胚萌发培养基包括以下成分：在WPM培养基中添加10～50μM嘧啶醇、2～8g/L植物凝胶、1～8g/L活性炭和20～40g/L蔗糖；再生植株壮根培养基包括以下成分：在1/2CRI72培养基或WPM培养基中添加0.20～0.60μM GA3、1～8g/L植物凝胶、1～8g/L活性炭和20～60g/L蔗糖；所述1/2CRI72培养基包括以下成分：5～10mM硝酸铵、5～10mM硝酸钾、0.5～1mM磷酸二氢钠、0.5～1.5mM氯化钙、0.5～1.5mM硫酸镁、100～150μM硼酸、80～100μM硫酸锰、20～40μM硫酸锌、1.0～1.5μM硫酸铜、0.5～1μM钼酸钠、0.5～1μM氯化钴、2～5μM碘化钾、80～100μM硫酸亚铁、80～100μM Na2EDTA、500～650μM硫酸钠、500～600μM肌醇、20～40μM烟酸、20～40μM盐酸硫胺、0.5～1μM生物素、2～5μM D‑泛酸钙、3～6μM盐酸吡多醇、5～10μM核黄素、5～10μM抗坏血酸、100～120μM L‑盐酸半胱氨酸和30～50μM甘氨酸；组培苗移栽培养基包括以下成分：按质量比，蛭石：椰糠：珍珠岩＝(2～6):(1～2):(1～2)。