[发明专利]一种椰子未成熟花序组织培养方法

权利要求书

1.一种椰子未成熟花序组织培养方法，其特征在于，包括以下步骤：

（1）外植体的选择：未成熟花序；

（2）依次采用愈伤诱导培养基、愈伤扩繁培养基、体胚诱导培养基、体胚成熟培养基、体胚萌发培养基、再生植株壮根培养基和组培苗移栽培养基进行培养；

其中，

愈伤诱导培养基为：在改良Y3培养基中添加 200~300 μM 2,4-D、3~8 μM BAP、3~8 μM2iP、2~8 g/L植物凝胶、1~8 g/L活性炭和20~40 g/L蔗糖；

愈伤扩繁培养基为：在改良Y3培养基中添加200~300 μM 2,4-D、3~8 μM BAP、3~8 μM2iP、5~20 μМ TDZ、2~8 g/L植物凝胶、1~8 g/L活性炭和20~40 g/L蔗糖；

改良Y3培养基为在Y3培养基的基础上对以下成分的含量进行调整：硫酸亚铁 30~50mg/L，钠螯合物40~60 mg/L，盐酸吡多醇、盐酸硫胺素、烟酸、泛酸钙、生物素和叶酸的含量均为0.03~0.08 mg/L，甘氨酸0.05~2 mg/L，不含肌醇、L-谷氨酰胺、L-精氨酸和L-天冬酰胺；

体胚诱导培养基为：在WPM培养基中添加 20~30 μM 2,4-D、3~8 μM BAP、3~8 μM 2iP、2~8 g/L 植物凝胶、1~8 g/L活性炭和20~40 g/L蔗糖；

体胚成熟培养基为：在WPM培养基中添加2~8 g/L 植物凝胶、1~8 g/L活性炭和20~40g/L蔗糖；

体胚萌发培养基为：在WPM培养基中添加10~50 μM嘧啶醇、2~8 g/L植物凝胶、1~8 g/L活性炭和20~40 g/L蔗糖；

再生植株壮根培养基为：在1/2CRI72培养基或WPM培养基中添加0.20~0.60 μM GA₃、1~8g/L植物凝胶、1~8 g/L活性炭和20~60 g/L蔗糖；所述1/2CRI72培养基为：5~10 mM硝酸铵、5~10 mM硝酸钾、0.5~1 mM磷酸二氢钠、0.5~1.5 mM氯化钙、0.5~1.5mM硫酸镁、100~150 μM硼酸、80~100μM硫酸锰、20~40 μM硫酸锌、1.0~1.5 μM硫酸铜、0.5~1 μM钼酸钠、0.5~1 μM氯化钴、2~5 μM碘化钾、80~100 μM硫酸亚铁、80~100 μM Na₂EDTA、500~650 μM硫酸钠、500~600 μM肌醇、20~40 μM烟酸、20~40 μM盐酸硫胺、0.5~1 μM生物素、2~5 μM D-泛酸钙、3~6 μM盐酸吡多醇、5~10 μM核黄素、5~10 μM抗坏血酸、100~120 μM L-盐酸半胱氨酸和30~50 μM甘氨酸；

组培苗移栽培养基为：按质量比，蛭石：椰糠：珍珠岩=(2~6):(1~2):(1~2)。

2.根据权利要求1所述的椰子未成熟花序组织培养方法，其特征在于，

愈伤诱导培养基为：在改良Y3培养基中添加250 μM 2,4-D、5 μM BAP、5 μM 2iP、4 g/L植物凝胶、3 g/L活性炭和30 g/L蔗糖；

愈伤扩繁培养基为：在改良Y3培养基中加入250 μM 2,4-D、5 μM BAP、5 μM 2iP、10 μМ TDZ、4 g/L植物凝胶、3 g/L活性炭和30 g/L蔗糖；

改良Y3培养基为在Y3培养基的基础上对以下成分的含量进行调整：硫酸亚铁 41.7mg/L，钠螯合物55.8 mg/L，盐酸吡多醇、盐酸硫胺素、烟酸、泛酸钙、生物素和叶酸的含量均为0.05 mg/L，甘氨酸 1 mg/L，不含肌醇、L-谷氨酰胺、L-精氨酸和L-天冬酰胺；

体胚诱导培养基为：在WPM培养基中添加 25 μM 2,4-D、5 μM BAP、5 μM 2iP、4 g/L 植物凝胶、3 g/L活性炭和30 g/L蔗糖；

体胚成熟培养基为：在WPM培养基中添加4 g/L 植物凝胶、3 g/L活性炭和30 g/L蔗糖；

体胚萌发培养基为：在WPM培养基中添加30 μM嘧啶醇、4 g/L植物凝胶、3 g/L活性炭和30 g/L蔗糖；

再生植株壮根培养基为：在1/2 CRI72培养基或WPM培养基中添加0.46 μM GA₃、2 g/L植物凝胶、3 g/L活性炭和45 g/L蔗糖；

蛭石、椰糠和珍珠岩的质量比为2：1：1。