[发明专利]一种半连续液体培养高效生产灵芝多糖的方法

摘要

本发明公开了一种半连续液体培养高效生产灵芝多糖的方法，该方法的步骤包括：（1）母种的活化扩繁；（2）摇瓶菌种的制备；（3）种子液的制备；（4）一氧化氮和乙烯协同诱导处理；（5）半连续液体培养。本发明采用的半连续液体培养方法可有效延长灵芝菌丝体的对数生长期，提高灵芝液体培养生物量，提高灵芝多糖产量，与常规的分批培养方法相比，本发明工艺合理，操作简单，可节省反复洗罐、灭菌等非发酵时间，提高了生产效率和设备利用率，降低了生产成本，可以用于大规模生产灵芝多糖，是一种很有应用前景的灵芝液体培养方法。

主权项

1.一种半连续液体培养高效生产灵芝多糖的方法，其特征在于，该方法的具体步骤如下：（1）母种的活化扩繁用接种铲挖取保存在PDA斜面上的大小为0.5cm2的灵芝母种，接种到新鲜的PDA斜面试管中，于28℃恒温培养5d，用直径为1cm的打孔器将已活化的灵芝母种接种于PDA平板培养基中央，于28℃恒温培养6~7d，待菌丝长满平板后接种；（2）摇瓶菌种的制备用直径1cm的打孔器，从平板上取2~3个大小相同的菌丝块接入装有液体培养基的锥形瓶中，装液量为400mL/1L，于29~31℃、130~150r/min条件下恒温振荡培养3~4d；（3）种子液的制备将液体培养基按照60~70%的装液量装入种子罐中进行高压蒸汽灭菌，灭菌结束后，等到培养基温度冷却至30℃左右时，将上述摇瓶菌种接入种子罐，接种量为6~10%，培养温度为29~31℃，转速为130~150r/min，培养5~6d即可获得种子液；（4）一氧化氮和乙烯协同诱导处理将发酵培养基按照60~70%的装液量装入发酵罐①中进行高压蒸汽灭菌，灭菌结束后，等到培养基冷却后，将上述种子液接入发酵罐①，接种量为8~12%，培养温度为29~31℃，转速为110~130r/min，向发酵罐①中先后通入一氧化氮和乙烯高纯气体，进行协同诱导处理8h；（5）半连续液体培养a）待协同诱导处理结束后，向发酵罐①中通入净化空气，通气量为0.5~0.7（V/V·min），培养温度和转速不变，培养40h后将转速调整为130~150r/min，通气量调整为1.0~1.2（V/V·min），在此条件下培养18h，然后放出部分体积的发酵液到经过空消灭菌处理的发酵罐②中，再补加相同体积的发酵培养基；b）发酵罐②中同时也补加相同体积的发酵培养基，培养温度为29~31℃，转速为130~150r/min，通气量为1.0~1.2（V/V·min），发酵液pH调整为4.4~4.6；c）发酵罐①补加发酵培养基后，在与发酵罐②相同的培养条件下继续培养48h，然后重复放出发酵液到发酵罐②，两个发酵罐补加发酵培养基继续培养48h的操作，如此重复进行3个周期；d）3个周期结束后，将两个发酵罐的转速调整为110~130r/min，通气量调整为0.5~0.7（V/V·min），培养温度保持不变，培养36h后结束培养，放罐。