[发明专利]一种胎盘来源的造血干细胞制备方法

摘要

本发明涉及造血干细胞制备技术领域，尤其为一种胎盘来源的造血干细胞制备方法，包括以下步骤：将胎盘脐带内的脐带血采集，用一次性注射器吸取采集保护液从脐带的动脉灌注采集保护液至胎盘组织后结扎脐带，生理盐水清洗胎盘外表面后，用一次性注射器吸取细胞动员液从脐带的动脉灌注，动员结束后，用一次性注射器吸取消化液从脐带的动脉灌注并回收动员的到的细胞悬液，消化结束后，利用一次性注射器吸取生理盐水从脐带的动脉灌注回收所有的细胞悬液，回收的细胞悬液经羟乙基淀粉沉淀和红细胞裂解液破碎去除红细胞后即制得造血干细胞。本方法能高效的从胎盘组织中分离包含造血干细胞的有核细胞，保证提取的细胞有稳定的数量、纯度和活性。

主权项

1.一种胎盘来源的造血干细胞制备方法，其特征在于，包括以下步骤：S1，胎盘于医院进行采集后，使用采血袋或注射器将脐带内部的脐带血全部采集，或者将脐带剪开把残留的脐带血全部弃去；S2，对采集的胎盘灌注采集保护液进行预处理，该采集保护液的成分为每100ml的CPDA含30mg的罂粟碱，利用一次性注射器吸取采集保护液从脐带的动脉灌注80ml的采集保护液至胎盘组织后结扎脐带，预处理30min；S3，在洁净环境下,生理盐水清洗胎盘外表面后，利用一次性注射器吸取细胞动员液从脐带的动脉灌注，当静脉流出来的液体为动员剂时，结扎动静脉后置于室温4h；S4，松开动静脉，一次性注射器吸取80ml的细胞消化液灌注进胎盘中的两条动脉，收集从静脉流出全部液体，结扎动静脉后置于37℃环境下2h；S5，松开动静脉，一次性注射器吸取400ml的生理盐水灌注进胎盘中的两条动脉，收集从静脉流出全部液体；S6，将收集的液体300g离心8min,弃去上清，细胞沉淀用DMEM基础培养基重悬至100ml；S7，该细胞悬液和注射用6％羟乙基淀粉按照体积比1:1混合，室温静置40min,吸取上清至离心管中300g离心8min,弃去上清；S8，收集的细胞沉淀：1倍红细胞裂解液体积比＝1:10的比例用1倍红细胞裂解液重悬细胞沉淀，涡旋震荡5s,室温下裂解残留的红细胞10min；S9，细胞悬液300g离心5min,离心后弃上清，获得包含造血干细胞在内的单个核细胞，加入40ml DMEM培养基重悬细胞沉淀，300g离心5min,离心后弃上清，沉淀用用DMEM培养基重悬细胞，获得胎盘来源的造血干细胞。