[发明专利]一种tDNA-FITC+CD@CaL+AF660比率荧光探针及其制备方法和应用

摘要

本发明公开了一种tDNA‑FITC+CD@CaL+AF660比率荧光探针及其制备方法，和在检测pH和/或Ca²⁺中的应用。所述方法包括：先合成一种发红色荧光的碳点，然后将对钙离子具有高特异性的钙离子配体与所述碳点相结合，构建得到荧光钙离子响应探针碳点@钙配体(CD@CaL)，然后将钙离子响应探针CD@CaL、pH响应的荧光素(FITC)和参比信号探针Alexa Fluor 660(AF660)偶联到四面体DNA(tDNA)顶点，构建得到具有CD@CaL、FITC和AF660三信号发射的tDNA‑FITC+CD@CaL+AF660比率荧光探针，可实现对pH和Ca²⁺的同时检测。本发明所述比率荧光探针具有较高的准确性、低毒性、选择性、抗干扰能力等，并实现了pH和Ca²⁺的同时检测。

主权项

1.一种tDNA‑FITC+CD@CaL+AF660比率荧光探针的制备方法，其特征在于，所述制备方法包括以下步骤：(A)钙离子响应探针CD@CaL的制备：(i)将对苯二胺溶于溶剂，转移到高压反应釜中高温反应，然后透析纯化，获得碳点；(ii)随后将钙离子配体与步骤(i)合成的碳点在溶剂中混合，进行席夫碱反应，获得钙离子响应探针CD@CaL；(B)tDNA‑FITC+CD@CaL+AF660比率荧光探针的制备：首先将荧光素FITC修饰的DNA、Alexa Fluor 660 AF660修饰的DNA、醛基‑CHO修饰的DNA以及组成四面体的第四条DNA粉末离心，让DNA粉末沉入管底，然后加入磷酸盐缓冲液溶解DNA粉末，随后混合、退火，然后冷却获得DNA四面体，然后加入钙离子响应探针CD@CaL，进行席夫碱反应，获得所述tDNA‑FITC+CD@CaL+AF660比率荧光探针。