[发明专利]一种快速、灵敏和现场检测PML/RARα融合基因的检测方法

摘要

本发明公开了一种基于等温指数扩增介导金纳米粒子聚集的PML/RARα融合基因快速检测方法，在金纳米粒子溶液中加入巯基修饰的固定探针，冰箱过夜后取出封闭，在溶液中加入模板DNA反应5分钟,再加入待测样本、DNA聚合酶与剪切酶进行指数扩增，30分钟后肉眼观察溶液颜色的改变。本发明利用等温核酸指数扩增技术以及金纳米粒子聚集颜色可变的特点，极大提高了PML/RARα融合基因检测的灵敏度以及检查速度，使其可以进行即时现场检验。利用等温核酸指数扩增技术可极大地提高灵敏度，不需特殊仪器以及专业人员，而利用金纳米粒子聚集颜色可变的特点，其检测结果可用肉眼观察，极大地简化了整个检测过程，使其具有广泛的应用前景，特别是边远资源匮乏的地区。

主权项

1.一种快速、灵敏和现场检测PML/RARα融合基因的检测方法，其特征在于：基于等温指数扩增介导金纳米粒子聚集PML/RARα融合基因快速检测法，包括以下步骤：将悬浮稳定的金纳米粒子与用 TE 缓冲液配制的巯基标记的捕获探针混合，置于4 ℃冰箱过夜；所述捕获探针的序列为5’‑CAGCTAGCCTTT‑thiol‑(CH2)3；所述TE 缓冲液含有 10mM Tris，1mM EDTA，pH 8.0;将步骤1中的金纳米粒子离心清洗、用TE 缓冲液分散，用 6‑ 巯基 ‑1‑ 己醇封闭1小时，再次离心、清洗、分散;在将步骤2得到核酸修饰的金纳米粒子溶液中加入模板DNA和待测样品，在室温反应5分钟；模板DNA序列为：5’‑CAGCTACGGGGCATCGACCTCAGCTG‑CTCTGGGTCTCAATGGGGCTGGGGATGGTGTGCTA;在步骤3中的溶液中加入含 dNTP、 聚合酶和剪切酶的指数扩增反应液，室温下反应30分钟后肉眼观察结果，根据溶液颜色是否变红作为是否存在白血病融合基因的依据，所述指数扩增反应液中含 0.5 mM dNTPs, 5单位 Nb.BbvCI 剪切酶， 3单位Klenow fragment，100 mM pH 7.5 Tris‑HCl, 500 mM 醋酸钾, 70 mM MgCl2, 100 μg/mL 胎牛血清。