[发明专利]一种免疫原性增强型小反刍兽疫N蛋白基因重组腺病毒的制备方法在审
申请号: | 201811258858.2 | 申请日: | 2018-10-26 |
公开(公告)号: | CN109295013A | 公开(公告)日: | 2019-02-01 |
发明(设计)人: | 陈静;王苗利;田夫林;张鹤晓;李佳璇;孙圣福;马慧玲;张月;孔祥华;蔺晓月 | 申请(专利权)人: | 山东省动物疫病预防与控制中心 |
主分类号: | C12N7/01 | 分类号: | C12N7/01;C12N15/861;C12N15/45;C12N15/66;A61K39/155;A61P31/14 |
代理公司: | 北京睿智保诚专利代理事务所(普通合伙) 11732 | 代理人: | 杨海明 |
地址: | 250000 山*** | 国省代码: | 山东;37 |
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摘要: | 本发明公开了一种免疫原性增强型小反刍兽疫N蛋白基因重组腺病毒的制备方法,将小反刍兽疫N蛋白基因和Ag85A基因重组到复制缺陷性腺病毒上,以提高N蛋白刺激机体产生抗体的能力。 | ||
搜索关键词: | 免疫原性增强 重组腺病毒 制备 复制缺陷性腺病毒 抗体 刺激 | ||
【主权项】:
1.一种免疫原性增强型小反刍兽疫N蛋白基因重组腺病毒的制备方法,其特征在于:包括如下步骤:S1,将脑心肌炎病毒的核糖体结合位点序列IRES连接到复制缺陷型腺病毒穿梭质粒pacAd5CMVK‑NpA上,然后提取重组腺病毒穿梭质粒pacAd5CMVK‑NpA‑IRES;S2,将含有小反刍兽疫N蛋白的DNA序列和含有结核分枝杆菌Ag85A基因的DNA序列克隆至重组腺病毒穿梭质粒pacAd5CMVK‑NpA‑IRES上,而后提取重组腺病毒穿梭质粒pacAd5CMVK‑NpA‑N‑IRES‑Ag85A;S3,将提取得到的重组腺病毒穿梭质粒pacAd5CMVK‑NpA‑N‑IRES‑Ag85A和复制缺陷型腺病毒pacAd59.2‑100骨架DNA经线性化后,转染真核细胞AD‑293,得到重组腺病毒rAd‑N‑IRES‑Ag85A;S4,将所得到的重组腺病毒rAd‑N‑IRES‑Ag85A经浓缩、纯化、扩增,制备得免疫原性增强型小反刍兽疫N蛋白基因重组腺病毒。
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