[发明专利]一种T载体的制备方法在审
| 申请号： | 201811255330.X | 申请日： | 2018-10-26 |
| 公开（公告）号： | CN109266672A | 公开（公告）日： | 2019-01-25 |
| 发明（设计）人： | 袁慧;田文奇 | 申请（专利权）人： | 苏州博睐恒生物科技有限公司 |
| 主分类号： | C12N15/66 | 分类号： | C12N15/66 |
| 代理公司： | 暂无信息 | 代理人： | 暂无信息 |
| 地址： | 215300 江苏省苏*** | 国省代码： | 江苏;32 |
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| 摘要： | 本发明公开了一种T载体的制备方法，利用硫代修饰引物扩增质粒载体；用限制性核酸内切酶Dpn I对模板质粒分子进行消化处理，消除环状质粒模板导致的阴性背景克隆；将PCR扩增的线性化载体进行5’外切核酸酶消化处理，得到T载体。通过上述方式，本发明的方法直接简单的PCR扩增即可制备T载体的线性化片段，消除了限制性核酸内切酶法和末端脱氧核苷酸转移酶法的技术缺陷，简单处理便能得到T载体。 | ||
| 搜索关键词： | 制备 限制性核酸内切酶 消化处理 末端脱氧核苷酸转移酶 外切核酸酶 线性化载体 环状质粒 技术缺陷 硫代修饰 模板质粒 引物扩增 质粒载体 线性化 阴性 克隆 | ||
【主权项】：
1.一种T载体的制备方法，其特征在于，包括步骤为：（1）利用硫代修饰引物PCR扩增模板质粒载体，得到线性化质粒载体；（2）用限制性核酸内切酶Dpn I对步骤（1）得到的线性化质粒载体中的模板质粒载体进行消化处理；（3）根据步骤（1）中引物的修饰特征，对步骤（2）处理后的线性化质粒载体PCR片段进行5’外切核酸酶处理，纯化处理的线性化质粒载体PCR片段，得到T载体。
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