[发明专利]碱性磷酸酶活性的双通道检测方法

摘要

本发明提供了一种比色‑荧光双通道检测碱性磷酸酶活性的方法，包括如下步骤：利用碱性磷酸酶催化其底物L‑抗坏血酸‑2‑磷酸三钠盐(AAP)水解，产生具有还原性的抗坏血酸(AA)，而AA能够将托伦试剂还原成Ag单质；在金纳米粒子(AuNPs)和石墨烯量子点(GQDs)存在的条件下，Ag将会沉积到AuNPs表面形成金银核壳纳米粒子(Au@AgNPs)并猝灭GQDs的荧光。本发明将酶促银离子金属化、AuNPs诱导银沉积与Au@AgNPs猝灭GQDs荧光相结合，利用颜色、紫外‑可见吸收光谱和荧光强度的变化，能够实现对碱性磷酸酶活性的比色‑荧光双通道检测。该方法具有灵敏度高、特异性强、响应快、操作简单、不需复杂仪器等特点。

主权项

1.一种碱性磷酸酶活性的双通道检测方法，其特征在于，包括如下步骤：将柠檬酸和半胱氨酸混匀后，在240℃下反应后，溶解于超纯水中，在分子量为500的透析袋透析，得到氮硫掺杂的石墨烯量子点；利用Turkevich‑Frens方法制备粒径为13nm的金纳米粒子；将所述石墨烯量子点、金纳米粒子和托伦试剂混匀后，得到检测液；将Tris‑HCl缓冲溶液、超纯水和L‑抗坏血酸‑2‑磷酸三钠盐混匀后，均分成若干份，除一份不加碱性磷酸酶之外，其余分别加入不同已知浓度的碱性磷酸酶，均置于37℃下孵育；孵育结束后，分别加入相同体积的所述检测液，室温下反应后，记录紫外‑可见吸收光谱和激发波长为346nm下的荧光发射光谱，计算不同碱性磷酸酶活性对应的A410/A520值，以及1‑F/F0值，得到A410/A520及1‑F/F0与碱性磷酸酶活性之间的关系。