[发明专利]一种植物免疫诱抗剂的鉴定方法

摘要

本发明公开了一种植物免疫诱抗剂的鉴定方法，该方法包括：以待定试剂浸种，得到植物幼苗；测定主根长，判断待定试剂能否促进植物根系生长，且进一步确定试剂的有效浓度区间；选择某一浓度处理下的幼苗，进行低温逆境处理，测定幼苗的主根褐化率和/或根系活力，判定待定试剂在表观上对植物根系是否有耐低温诱抗作用；提取幼苗根部总蛋白，获取蛋白质的鉴定和定量结果，筛选差异表达蛋白质，寻找差异表达蛋白质中是否存在与低温逆境相关的功能性蛋白；判定待定试剂是否为具有耐低温诱抗作用的植物免疫诱抗剂。本方法通过测定根系农艺指标、主根褐化率、根系活力和分析差异蛋白质，鉴定具促进水稻根系生长和提高水稻根系耐低温能力的植物免疫诱抗剂。

主权项

1.一种植物免疫诱抗剂的鉴定方法，其特征在于，包括：(1)配制不同浓度梯度的待定试剂，以采用不同浓度待定试剂浸种的处理为处理组I，清水浸种的处理为对照组I，对植物种子进行浸种、清洗和催芽，得到不同处理下的植物幼苗；(2)测定植物幼苗的根系农艺指标，以是否存在处理组I幼苗根系农艺指标显著大于对照组I的情况作为依据，判断待定试剂能否促进植物根系生长；若处理组I中所有浓度梯度处理下的幼苗根系农艺指标均不显著大于对照组I，则判定待定试剂对植物根系生长无促进作用，不再进行后续鉴定步骤；反之，则判定待定试剂对植物根系生长有促进作用，并进一步确定待定试剂促进植物根系生长的有效浓度区间；(3)从所述有效浓度区间内选择某一浓度，取出步骤(1)中该浓度处理下的植物幼苗，与对照组I幼苗一同置于1～10℃条件下进行低温逆境处理，得到处理组II和对照组II的幼苗，处理结束后，测定幼苗的主根褐化率和/或根系活力，统计分析两组数据是否具有显著性差异；若处理组II幼苗的主根褐化率显著低于对照组II，和/或根系活力显著高于对照组II，则进行步骤(4)，反之，则判定待定试剂在表观上对植物根系无耐低温诱抗作用，不再进行后续鉴定步骤；(4)取步骤(3)中处理组II和对照组II的幼苗，提取和分离幼苗根部的总蛋白，利用质谱技术获取蛋白质的鉴定和定量结果，并进一步筛选处理组II和对照组II之间的差异表达蛋白质，再利用基因功能和信号通路分析技术，寻找差异表达蛋白质中是否存在与低温逆境相关的功能性蛋白；若存在与低温逆境相关的功能性蛋白，则判定待定试剂为具有耐低温诱抗作用的植物免疫诱抗剂，反之则无。