[发明专利]从胎盘血管分离间充质干细胞的方法和所用消化酶组合物

摘要

本发明涉及从胎盘血管分离间充质干细胞的方法和所用消化酶组合物。所述方法包括以下步骤：胎盘用酒精消毒；从胎盘剥离出胎盘血管；剪成碎块，用PBS清洗，滤除残留血污，得到胎盘血管组织；加混合酶液消化；终止消化，过滤收集组织液；离心所得细胞沉淀为原始的胎盘间充质干细胞(P0代)，用DMEM‑F12基础培养基重悬，取样并计数有核细胞的数量和活率；所得细胞用冻存保护液冻存以便使用前再复苏培养，或者继续进行传代和/或所得间充质干细胞进行细胞鉴定和/或检测、冻存、建库等操作。本发明方法可以有效的提高从胎盘的血管分离间充质干细胞的效率。

主权项

1.从胎盘的血管中分离间充质干细胞的方法，该方法包括以下步骤：(1)将胎盘浸泡于75％酒精消毒30秒，然后用PBS冲洗两遍；(2)从胎盘的脐带根处剥离出胎盘血管，用手术镊挤压血管以清除血污；(3)将血管剪碎成1～2mm^3碎块，用PBS清洗，再用300目滤网过滤去除残留血污，得到胎盘血管组织；(4)加混合酶液消化；(5)添加血清终止消化，再用300目滤网过滤，收集组织液，PBS洗涤，合并清洗液；(6)离心得到细胞沉淀，用PBS清洗一遍，离心，得到原始的胎盘间充质干细胞(P0代)，用DMEM‑F12基础培养基重悬，取样并计数有核细胞的数量和活率；所得细胞用冻存保护液冻存以便使用前再复苏培养，或者所得细胞接着进行下面步骤的操作；(7)使细胞接种至T75培养瓶，添加完全培养基培养；(8)培养过程中每3天换液一次，直至细胞融合率达80％以上，传代，得到P1代胎盘间充质干细胞；以及任选的下列一个或多个步骤：(9)针对步骤(8)所得胎盘间充质干细胞进行细胞鉴定和/或检测；(10)将步骤(8)所得传代后的胎盘间充质干细胞于液氮中冻存；(11)建立包含以上信息的胎盘干细胞的数据库，并使该数据库与步骤(10)的冻存细胞进行关联。