[发明专利]一种核桃肽的复合酶制作方法

摘要

本发明提供一种核桃肽的复合酶制作方法，其步骤包括：原料预处理、漆酶处理、淀粉酶处理、葡萄糖氧化酶处理、过氧化氢酶处理、复合蛋白酶处理、灭酶灭菌、酸沉、固液分离、超滤、浓缩和干燥等12个工艺环节；采用本发明技术所得核桃肽产品呈淡黄色粉末状，易溶于水、无沉淀、无明显苦味，溶液澄清透明，其中相对分子量在500‑5000Da的多肽纯度不低于80％，产品得率不低于60％。

主权项

1.一种核桃肽的复合酶制作方法，其特征在于，包括如下步骤：步骤(1)原料预处理：脱脂核桃蛋白粉经粉碎、过40‑60目筛网，取过筛后的脱脂核桃蛋白粉，置于酶解罐中，加入4‑8倍量水，浸泡10‑30min，高速匀浆5‑10min，备用；步骤(2)漆酶处理：按脱脂核桃蛋白粉质量0.1％‑0.5％的比例加入食用级漆酶，调节pH2‑4，在40‑60℃条件下水解10‑40min；步骤(3)淀粉酶处理：漆酶水解结束后，加热处理脱脂核桃蛋白粉溶液，使其温度达到85‑95℃，并保持15‑30min，使脱脂核桃蛋白粉中的淀粉充分糊化后，停止加热并冷却；待温度达到50‑70℃时，按脱脂核桃蛋白粉质量0.5％‑0.8％的比例加入耐高温淀粉酶或糖化酶，调节pH5.5‑6.5，水解40‑60min，使脱脂核桃蛋白粉中所含淀粉完全水解成低聚糖；之后趁热离心，弃上清液，收集沉淀物；之后在沉淀物中加入4‑6倍量体积的水，重复搅拌、浸提、离心2‑3次；最后离心，收集沉淀物，备用；步骤(4)葡萄糖氧化酶处理：淀粉酶处理结束后，按脱脂核桃蛋白粉质量0.2％‑0.4％的比例加入食用级葡萄糖氧化酶，调节pH3.5‑6.5，在40‑60℃条件下水解30‑60min；步骤(5)过氧化氢酶处理：葡萄糖氧化酶水解结束后，按脱脂核桃蛋白粉质量0.2％‑0.5％的比例加入食用级过氧化氢酶，调节pH6‑7，在30‑40℃条件下水解30‑60min；步骤(6)复合蛋白酶处理：过氧化氢酶处理结束后，按脱脂核桃蛋白粉质量0.2％‑0.8％的比例加入食用级中性蛋白酶，调节pH6‑7，在30‑60℃条件下水解30‑60min；然后，再加入脱脂核桃蛋白粉质量0.1％‑0.5％的比例加入食用级风味蛋白酶，调节pH6‑7，在30‑60℃条件下水解30‑60min；步骤(7)灭酶、灭菌处理：复合蛋白酶处理结束后，所得酶解液通入过热水蒸气，加热至中心温度到达85‑95℃，保持10‑30min进行灭酶、灭菌处理；步骤(8)酸沉处理：将灭酶、灭菌处理后的核桃蛋白酶解液的pH值调节到4‑4.5，室温下搅拌、静置1h；酶解液中的大分子蛋白质和分子量10000Da以上的多肽组分会逐渐沉淀析出；步骤(9)固液分离：经酸沉处理后的酶解液，采用卧螺离心机或旋流分离技术进行固液分离，将核桃蛋白酶解液中的可溶性组分和固相组分进行分离，收集富含核桃肽的上清液；步骤(10)超滤处理：采用中空纤维超滤膜技术，对步骤(9)中所得的上清液进行超滤处理，保证超滤过程中的操作压力为0.1‑0.5MPa，除去酶解液中分子量小于500Da的游离氨基酸组分或短肽，将其中相对分子量在500Da以上的多肽分离出来；步骤(11)浓缩处理：将经过超滤处理所得的含分子量500Da以上的多肽液进行真空浓缩，浓缩至多肽液固形物含量在30％‑50％即可；步骤(12)干燥：采用离心式喷雾干燥或者冷冻干燥法，对步骤(11)所得的多肽浓缩液进行干燥，最终得到核桃肽产品；该产品呈乳白至浅黄色粉末状，易溶于水，口味清鲜，无明显苦味，其中相对分子量在500‑5000Da的多肽含量在80％以上。