[发明专利]一种基于金壳-上转换手性二聚体对大肠杆菌耐药性定量分析的方法

摘要

一种基于金壳‑上转换手性二聚体对大肠杆菌耐药性定量分析的方法，属于材料化学技术领域。本发明首先制备金壳纳米粒子，在金壳纳米粒子表面修饰多粘菌素B抗体，在上转换纳米粒子表面修饰多粘菌素B，再将多粘菌素B修饰的上转换纳米粒子分别与不同耐药程度的大肠杆菌混合培养，反应一段时间后，加入多粘菌素B抗体修饰的金壳纳米粒子，通过抗原‑抗体反应，形成金壳与未结合的上转换形成二聚体结构。通过荧光和圆二色光谱可以实现对大肠杆菌耐药程度的测定。本发明制备出了结构均一，生物相容性好的金壳‑上转换手性二聚体结构，提供了能够通过荧光和CD信号同时检测大肠杆菌耐多粘菌素B程度的方法，建立了大肠杆菌耐多粘菌素B浓度与荧光信号和CD信号之间的标准曲线，具有灵敏度高、选择性好，检测限低、用时短的优点。

主权项

1.一种基于金壳‑上转换手性二聚体对大肠杆菌耐药性定量分析的方法，其特征是步骤如下：（1）金纳米粒子的合成：利用单宁酸还原氯金酸合成直径为8‑12nm的金纳米粒子；（2）金壳纳米粒子的制备：将步骤（1）制备所得金纳米粒子溶于聚乙烯吡咯烷酮溶液中，再加入硝酸银和抗坏血酸溶液，合成金包银纳米颗粒，然后再加入氯金酸溶液制备金壳纳米粒子；（3）上转换纳米粒子表面修饰多粘菌素B：首先在上转换纳米粒子表面偶联半胱氨酸，通过氨基‑羧基反应，上转换纳米粒子与多粘菌素B相连；（4）金壳纳米粒子表面修饰多粘菌素B抗体：通过Au‑S键，使步骤（2）所得金壳纳米粒子与多粘菌素B抗体相连；（5）金壳‑上转换手性二聚体的制备：通过抗原‑抗体反应，制备金壳‑上转换手性二聚体；（6）细菌来源和培养条件：取耐药程度分别为4、8、16、20、24mg/mL的五株耐多粘菌素B大肠杆菌菌株；将单个菌落接种到10mL LB培养基中，并在37℃恒定振荡200rpm下培养过夜；获得指数生长期5×10 7 CFU / mL的细菌，其OD600为0.7，然后，通过pH 7.4的PBS缓冲液将细菌稀释到终浓度为1×10 3 CFU / mL，用于以下实验；（7）金壳‑上转换手性二聚体对大肠杆菌耐药性的检测：将步骤（6）培养的不同耐药程度的大肠杆菌与步骤（3）得到的多粘菌素B修饰的上转换纳米粒子共同孵育8 h；加入步骤（4）中的多粘菌素B抗体修饰的金壳，通过抗原‑抗体反应，金壳与未结合的上转换纳米粒子结合形成二聚体，产生CD信号；通过细菌膜表面上转换荧光的变化检测耐药程度；（8）金壳‑上转换手性二聚体对大肠杆菌耐药性检测的表征，建立标准曲线：将步骤（7）中的细菌进行荧光信号表征，并建立标准曲线；同时，离心去除细菌，将上清进行CD信号表征，建立标准曲线。