[发明专利]一种Wnt10aflox/flox小鼠模型的构建方法有效
| 申请号： | 201811087832.6 | 申请日： | 2018-09-18 |
| 公开（公告）号： | CN109090040B | 公开（公告）日： | 2019-09-10 |
| 发明（设计）人： | 韩冬;冯海兰;刘洋;刘浩辰;王升威;王越 | 申请（专利权）人： | 北京大学口腔医学院 |
| 主分类号： | A01K67/027 | 分类号： | A01K67/027;C12N15/90 |
| 代理公司： | 重庆强大凯创专利代理事务所(普通合伙) 50217 | 代理人： | 隋金艳 |
| 地址： | 100000 北*** | 国省代码： | 北京;11 |
| 权利要求书： | 查看更多 | 说明书： | 查看更多 |
| 摘要： | 本发明提供了一种新的Wnt10aflox/flox小鼠模型的构建方法，以及鉴定筛选Wnt10aflox/flox小鼠和Wnt10aflox/+小鼠的PCR实验方法涉及的引物序列。本发明的Wnt10aflox/flox小鼠模型的构建方法用于构建Wnt10a基因的条件性敲除小鼠模型时，会敲除小鼠模型Wnt10a基因第二外显子，导致转录出来的转录本下游开放阅读框架移位，使其基因功能失活，达到基因敲除的实验效果。 | ||
| 搜索关键词： | 小鼠 构建 敲除小鼠 基因功能失活 开放阅读框架 转录 基因敲除 实验效果 引物序列 条件性 外显子 转录本 基因 移位 制备 筛选 应用 | ||
【主权项】：
1.一种Wnt10aflox/flox小鼠模型的构建方法，其特征在于包括下述步骤：(1)利用基因打靶技术在小鼠胚胎干细胞的Wnt10a基因第二外显子序列两端插入loxp序列，包括构建载体、形成打靶载体和将打靶载体转入小鼠胚胎干细胞的步骤，所述构建载体还包括构建所述小鼠胚胎干细胞的Wnt10a基因条件性敲除载体的步骤：通过PCR扩增所述小鼠胚胎干细胞的Wnt10a基因同源臂及打靶区域，所述小鼠胚胎干细胞的Wnt10a基因同源臂两端带有与骨架同源的15bp碱基序列，酶切验证PCR产物，电泳检测PCR产物是否为特异性扩增，所述小鼠胚胎干细胞的Wnt10a基因的序列为SEQ NO.1；(2)将步骤(1)所述的小鼠胚胎干细胞植入假孕母鼠的子宫内，生产出的嵌合体小鼠与野生小鼠交配，筛选出基因型为Wnt10aflox/+的F1代小鼠，所述筛选出基因型为Wnt10aflox/+的F1代小鼠的方法为PCR实验方法，用的引物序列为：SEQ NO.2: TCACTGTCACTCGAGGCAASEQ NO.3: TCTCTCTGACCCTAAGGAGC；(3)选择所述步骤(2)筛选出的基因型为Wnt10aflox/+的F1代小鼠合笼交配，生产出F2代小鼠，筛选出基因型为Wnt10aflox/flox的F2代小鼠；所述筛选出基因型为Wnt10aflox/flox的F2代小鼠的方法为PCR实验方法，用的引物序列为：SEQ NO.2: TCACTGTCACTCGAGGCAASEQ NO.3: TCTCTCTGACCCTAAGGAGC。
下载完整专利技术内容需要扣除积分，VIP会员可以免费下载。
该专利技术资料仅供研究查看技术是否侵权等信息，商用须获得专利权人授权。该专利全部权利属于北京大学口腔医学院，未经北京大学口腔医学院许可，擅自商用是侵权行为。如果您想购买此专利、获得商业授权和技术合作，请联系【客服】
本文链接：http://www.vipzhuanli.com/patent/201811087832.6/，转载请声明来源钻瓜专利网。
