[发明专利]一种河蚬线粒体基因组富集提取及鉴定方法

摘要

本发明提供了河蚬线粒体全基因组DNA的富集、提取以及通过线粒体基因对河蚬进行鉴定的方法。通过本发明提供的富集、提取方法，能够成功地获得河蚬足量的线粒体基因组DNA。本发明根据河蚬线粒体的序列设计nad2‑cox3基因的引物对Mit1，根据cob基因片段设计的引物对Mit2，本发明提供的两对引物对特异性强，能够特异扩增出河蚬的线粒体序列，但对于其他物种的线粒体均扩增不出该基因片段，具有扩增性能好、区分度好、产生副产物少等优点，可以对河蚬进行物种鉴定。

主权项

1.一种河蚬线粒体基因组富集提取及鉴定方法，其特征在于，所述方法包括以下步骤：S1：待鉴定样品差速离心法粗提线粒体，进而从粗提线粒体中提取待鉴定样品的线粒体基因组DNA；S2：根据河蚬线粒体nad2‑cox3基因设计特异性引物对Mit1，根据河蚬线粒体cob基因设计特异性引物对Mit2；S3：以S1提取的待鉴定样品的线粒体基因组DNA为模板，采用引物对Mit1和/或引物对Mit2进行PCR扩增；S4：将S3获得的PCR扩增产物进行琼脂糖凝胶电泳鉴定和测序鉴定；所述琼脂糖凝胶电泳鉴定为将琼脂糖凝胶电泳条带大小与S3扩增的对应基因的已知分子量对比是否一致，所述nad2‑cox3基因分子量为580bp，所述cob基因分子量为360bp，如果具有与S3扩增的对应基因相同大小的条带则表示待鉴定样品为河蚬；所述测序鉴定为将测序结果与S3扩增的对应基因的已知序列对比是否一致，所述nad2‑cox3基因已知序列如SEQ ID NO.1所示，cob基因已知序列如SEQ ID NO.2所示，如果测序结果与已知序列一致则表示待鉴定样品为河蚬。