[发明专利]一种薄荷的种质离体保存方法

摘要

本发明公开了一种薄荷的种质离体保存方法，包括以下技术环节：（1）薄荷植株的预处理；（2）外植体消毒与接种；（3）不定芽诱导培养；（4）种质保存培养；（5）种质复壮；（6）成苗培养；（7）炼苗移栽。本发明提供的方法一个保存周期可保存薄荷种质资源达3‑4年，极大的延长了保存时间，并且保存的种质遗传性状稳定，一旦需要时可通过复壮恢复活性，随时为生产大规模提供种苗，是一种实用价值很高的种质离体保存方法。

主权项

1.一种薄荷的种质离体保存方法，其特征在于，该方法包括以下步骤：（1）薄荷植株的预处理选择露地栽培、健壮无病的薄荷1年生植株，用自来水将整个植株冲洗干净，尤其要洗净根部泥土，然后将植株根部浸入含有0.1‑0.3mg/L TDZ的营养液中，4℃低温预处理5‑8天；（2）外植体消毒与接种将预处理后的薄荷植株用毛刷蘸少许洗涤剂，在流水下冲洗30‑40min；然后切取幼嫩的茎段，除去叶片，保留腋芽，转移到超净工作台中，先用70%乙醇处理30s，然后用无菌水洗涤3‑4遍，再用2.5%次氯酸钠处理4min，最后用无菌水洗涤3‑4遍，滤纸吸去多余水分；将茎段切成1 cm左右带腋芽的小段作为外植体，接种于不定芽诱导培养基上；（3）不定芽诱导培养将上述培养基置于温度24‑26℃、光照强度1300‑1500Lx、光照12h/d的条件下，培养28‑36d诱导出不定芽；（4）种质保存培养待诱导出的不定芽长到1.0‑1.5cm时，转接至种质保存培养基上，封上瓶口后置于温度4‑7℃、光照强度500‑800Lx、每天光照10‑12h的培养条件下缓慢生长，每12个月继代接种一次，然后继续进行种质保存培养；（5）种质复壮薄荷种质保存期结束后，将上述步骤中缓慢生长的不定芽转接到复壮培养基中培养以恢复活性，培养条件控制为温度25‑27℃、光照强度2000‑2200Lx、每天光照12‑14h，每30d左右继代1次，继代2‑3次可获得增殖的不定芽；（6）成苗培养将上述不定芽切割成单个转接入壮苗生根培养基中，置于温度24‑28℃、光照强度2600‑3000Lx、每天光照14‑16h的条件下培养25‑30d，不定芽可长成株高5‑8cm、具有7‑10条根系的薄荷组培苗；（7）炼苗移栽将薄荷组培苗连同组培瓶从培养室取出，置于22‑30℃的温室大棚中，在自然光照下炼苗7d，再打开瓶口炼苗3‑5 d；然后将组培苗从瓶中小心取出，洗去根部的培养基残留，将根部浸入质量分数为0.1%的花宝1号溶液中培养3‑5小时，再移栽入大田，进行常规栽培管理。