[发明专利]基于Cas9介导的定点整合FABP4基因和MSTN基因点突变打靶载体及重组细胞在审
| 申请号： | 201811039181.3 | 申请日： | 2018-09-06 |
| 公开（公告）号： | CN109112159A | 公开（公告）日： | 2019-01-01 |
| 发明（设计）人： | 张涌;康健;权富生;谢晓刚;葛陆星;董翔宸;王丰瑜;孙洪政;韩成全 | 申请（专利权）人： | 西北农林科技大学 |
| 主分类号： | C12N15/85 | 分类号： | C12N15/85;C12N15/90;C12N5/10;C12N15/877 |
| 代理公司： | 西安通大专利代理有限责任公司 61200 | 代理人： | 范巍 |
| 地址： | 712100 陕*** | 国省代码： | 陕西;61 |
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| 摘要： | 本发明公开了一种基于Cas9介导的定点整合FABP4基因和MSTN基因点突变打靶载体及重组细胞，本发明利用电穿孔的方法将靶向MSTN基因的Cas9真核表达载体和打靶载体共转染鲁西黄牛胎儿成纤维细胞，实现对鲁西黄牛胎儿成纤维细胞进行基因打靶，获得MSTN位点定点敲入FABP4基因和MSTN基因点突变的牛胎儿成纤维细胞。通过Junction PCR筛选和验证获得了打靶的阳性克隆细胞。以该阳性克隆细胞为供核细胞移入去核的牛卵母细胞中，可获得转基因克隆胚胎，为快速、高效研制优质转基因肉牛新品种提供坚实基础。 | ||
| 搜索关键词： | 打靶载体 点突变 胎儿成纤维细胞 阳性克隆细胞 定点整合 鲁西黄牛 重组细胞 介导 牛胎儿成纤维细胞 真核表达载体 牛卵母细胞 转基因克隆 供核细胞 基因打靶 坚实基础 电穿孔 共转染 转基因 靶向 去核 位点 移入 胚胎 肉牛 新品种 验证 | ||
【主权项】：
1.一种基于Cas9介导的定点整合FABP4基因和MSTN基因点突变的打靶载体，其特征在于：该打靶载体包括用于通过同源重组定点整合至MSTN基因的启动子与终止密码子序列之间的重组基因P2A‑FABP4‑PolyA，以及作为同源臂的sgRNA靶点上游和下游同源序列，其中，sgRNA靶点上游同源序列引入有可以使MSTN蛋白功能丧失的点突变；所述的重组基因P2A‑FABP4‑PolyA包括依次排列于的P2A、FABP4基因CDS区和PolyA。
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