[发明专利]基于CRISPR/Cas9双切口酶技术的家蚕基因精准敲除系统及其应用有效
| 申请号： | 201810928945.8 | 申请日： | 2018-08-10 |
| 公开（公告）号： | CN109136262B | 公开（公告）日： | 2022-07-01 |
| 发明（设计）人： | 沈兴家;陈艳荣;朱娟;蒋涛;唐顺明;赵巧玲 | 申请（专利权）人： | 江苏科技大学 |
| 主分类号： | C12N15/85 | 分类号： | C12N15/85;C12N15/90 |
| 代理公司： | 南京经纬专利商标代理有限公司 32200 | 代理人： | 余俊杰 |
| 地址： | 212003 *** | 国省代码： | 江苏;32 |
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| 摘要： | 本发明公开了基于CRISPR/Cas9双切口酶技术的家蚕基因精准敲除系统，所述系统包括Cas9突变体表达载体pHS‑BCR‑LW062‑cas9(全长8654bp)和sgRNA(指导序列)产生载体pHS‑BPR‑LC001(全长4893bp)。本发明所述基于CRISPR/Cas9双切口酶技术的家蚕基因精准敲除系统能够靶向敲除家蚕功能基因，并极大降低其脱靶率，至少降低50倍，甚至降低1500倍；所述系统极大地提高了基因敲除的精准率，且反应流程简单；本发明所述系统中的Cas9突变体表达载体pHS‑BCR‑LW062‑cas9引入家蚕核型多角体病毒的强启动子IE1和家蚕密码子优化的cas9D10A，使该酶的表达效率大大增加；本发明所述系统中的pHS‑BPR‑LC001，使用的家蚕的U6启动子，插入IIS型Bsa I酶切位点，可利用golden gate连接法快速构建sgRNA表达载体，大大节省了操作步骤。 | ||
| 搜索关键词： | 基于 crispr cas9 切口 技术 家蚕 基因 精准 系统 及其 应用 | ||
【主权项】：
1.基于CRISPR/Cas9双切口酶技术的家蚕基因精准敲除系统，其特征在于，所述系统包括Cas9突变体表达载体pHS‑BCR‑LW062‑cas9和sgRNA产生载体pHS‑BPR‑LC001。
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