[发明专利]基于CRISPR/Cas9双切口酶技术的家蚕基因精准敲除系统及其应用

权利要求书

1.基于CRISPR/Cas9双切口酶技术的家蚕基因精准敲除系统，其特征在于，所述系统包括Cas9突变体表达载体pHS-BCR-LW062-cas9和sgRNA产生载体pHS-BPR-LC001；所述pHS-BCR-LW062-cas9载体的骨架载体为pZDonor载体，所述pZDonor载体上连有家蚕密码子优化的Cas9突变体cas9D10A全长CDS序列SEQ ID NO.3，且两端加有核定位信号NLS，所述pZDonor载体上，Cas9突变体cas9D10A所使用的启动子为BmNPV的启动子IE1，并整合选择标记EGFP基因序列，所述pZDonor载体上，EGFP与cas9D10A共用一个IE1启动子，CDS区以T2A序列间隔；pHS-BPR-LC001载体的骨架载体为pENTR-L4，pENTR-L4载体上连有sgRNA元件，sgRNA元件由sgRNA启动子、LacZ、sgRNA-scaffold、终止子及靶点插入酶切位点组成，其中，sgRNA元件的序列为SEQ ID NO.5，sgRNA-scaffold的序列为SEQ ID NO.4，sgRNA启动子为U6启动子，靶点插入酶切位点为Bsa I，酶切位点信息为SEQ ID NO.1和SEQ ID NO.2。

2.权利要求1所述基于CRISPR/Cas9双切口酶技术的家蚕基因精准敲除系统在家蚕基因敲除中的应用。

3.权利要求1所述基于CRISPR/Cas9双切口酶技术的家蚕基因精准敲除系统在家蚕基因/基因组编辑中的应用。