[发明专利]一种提取红麻花药总RNA的方法

摘要

本发明涉及生物化学技术领域，特别是指一种提取红麻花药总RNA的方法。解决了现有技术中红麻花药RNA提取过程易被降解难，产物易被红麻次生代谢物多糖多酚污染的技术问题。本研究用饱和异硫氰酸胍替代氯化钠，采用改良CTAB法提取红麻花药总RNA，本申请的提取方法能有效抑制红麻总RNA降解，提高红麻总RNA纯度和完整性，而且试剂成本低，操作流程简单。

主权项

1.一种提取红麻花药总RNA的方法，其特征在于，步骤为：（1）称取0.2‑0.5 g新鲜或经液氮冷冻处理后存放于‑80 ℃冰箱的花药，立即置于预先冰冻的研钵中，加入足量液氮迅速将花药研成粉末，快速将粉末转入RNase‑free离心管中；（2）向离心管中加入1 mL 65 ℃预热的改良CTAB裂解液，涡旋震荡30‑60 s，65℃，水浴10 min；（3）加入体积比为25:24:1的水饱和酚、氯仿和异戊醇混合液，充分混匀，4 ℃，12,000 rpm，离心5 min，取上清Ⅰ；（4）以上清Ⅰ体积为基准，按照上清液：异硫氰酸胍=1.7：1的比例加入饱和异硫氰酸胍，再加入0.5倍的无水乙醇，颠倒混匀；（5）吸取混合液Ⅱ，将混合液Ⅱ转移到RNA纯化柱中，冰上静置2 min；（6）4 ℃，12000 rpm，处理30 s，弃去RNA纯化柱的收集管内的液体，重复此步骤直至将混合液Ⅱ全部转移完；（7）向经步骤（6）处理的RNA纯化柱中加入700 μL 75%乙醇，4 ℃，12000 rpm处理30 s，弃去收集管内的滤液，重复该步骤1次；（8）将经步骤（7）处理的RNA纯化柱，于4 ℃，12000 rpm，离心空甩2 min；（9）将经步骤（8）处理的RNA纯化柱放入新的1.5 ml RNase‑free EP管，向RNA纯化柱中央加入30 μl RNase‑free ddH20，于冰上静置2 min；（10）将经步骤（9）处理的RNA纯化柱和EP管于4℃，12000 rpm，离心1 min，弃去RNA纯化柱，EP管中收集的液体即为纯化的红麻花药总RNA。