[发明专利]α-突触核蛋白积聚的检测探针的制备方法及其产品和应用

摘要

本发明涉及一种α‑突触核蛋白积聚的检测探针的制备方法及其产品和应用，以磁性四氧化三铁纳米颗粒（Fe₃O₄ NPs）为载体，通过正硅酸乙酯（TEOS）和3‑氨基丙基三甲氧基硅烷（APTES）对Fe₃O₄ NPs表面氨基化改性；进一步地，以1‑乙基‑3‑(3‑二甲基氨丙基)‑碳化二亚胺（EDC）和N‑羟基琥珀酰亚胺（NHS）为偶联剂，连接α‑突触核蛋白单克隆抗体。利用Fe₃O₄ NPs自身催化活性，以Fe₃O₄ NPs为载体，包附二氧化硅外壳，进而连接α‑突触核蛋白单克隆抗体，合成一种靶向帕金森病，并且可定点清除细胞内ROS，延缓α‑突触核蛋白进一步积聚的检测探针。探针结合靶向、成像及治疗为一体，合成方法简单，所用原料生物安全性高，催化活性较佳、物理稳定性好。

主权项

1.一种α‑突触核蛋白积聚的检测探针的制备方法，其特征在于以磁性四氧化三铁纳米颗粒（Fe3O4 NPs）为载体，通过正硅酸乙酯（TEOS）和3‑氨基丙基三甲氧基硅烷（APTES）对Fe3O4 NPs表面氨基化改性；进一步地，以1‑乙基‑3‑(3‑二甲基氨丙基)‑碳化二亚胺（EDC）和N‑羟基琥珀酰亚胺（NHS）为偶联剂，连接α‑突触核蛋白单克隆抗体，包括以下步骤：（1）磁性四氧化三铁纳米颗粒（Fe3O4 NPs）颗粒生成及表面氨基化改性：采用化学共沉淀法合成小粒径Fe3O4 NPs：称取0.6‑1.2g的FeCl3和0.38‑0.76g的 Fe SO4溶解在50 mL去离子水中，20 mL 1.5 M Na OH迅速加入含铁溶液中，室温搅拌10 min，采用乙醇清洗黑色沉淀，真空干燥过夜得小粒径Fe3O4 NP；采用水热法合成大粒径Fe3O4 NPs：称取1.3‑2.6g FeCl3 溶解于40 mL乙二醇中，均匀搅拌形成亮黄色溶液，3.6 g Na Ac和1.0 g PEG加入溶液中，室温搅拌30 min，混合液转入反应釜中，200℃反应18 hr，生成的黑色沉淀采用乙醇清洗，真空干燥过夜得大粒径Fe3O4 NPs；Fe3O4 NPs@SiO2合成：2.0 mg Fe3O4 NPs在室温下分散在10 mL的环己烷中，随后，1.8 g Triton‑X 100，1.6 mL正己醇以及0.34 mL H2O在搅拌条件下加入到上述溶液中，形成反相微乳液，15 min后加入10‑50 μL TEOS到微乳液，30 min后0.1 mL 25~28%氨水加入到上述混合液，作用24 h后，乙醇沉淀Fe3O4 NPs@SiO2纳米粒子，Fe3O4 NPs@SiO2纳米粒子通过离心分离，然后乙醇和水分别洗涤5次，60℃真空干燥得Fe3O4 NPs@SiO2；Fe3O4 NPs@SiO2表面氨基化改性：0. 4 g二氧化硅包裹的四氧化三铁粒子与0.1‑1 mL的APTES，100mL异丙醇混合并超声分散均匀，通氮气30分钟后，加热到70°C，机械搅拌6 hr；纳米粒子进行磁分离，然后用乙醇和水重复洗涤，60℃真空干燥，得到复合物I；（2）连接α‑突触核蛋白：100 mg复合物I溶于10 mL超纯水中， 加入0.3‑0.5g的EDC和0.5‑0.6 g 的NHS，室温搅拌24 hr，加入3‑5 mmol的α‑突触核蛋白单克隆抗体，室温搅拌24 hr，采用磁分离，用超纯水清洗三次，冷冻干燥，即获得可靶向α‑突触核蛋白并缓解α‑突触核蛋白积聚的探针。