[发明专利]α-突触核蛋白积聚的检测探针的制备方法及其产品和应用

说明书

本发明涉及一种α‑突触核蛋白积聚的检测探针的制备方法及其产品和应用，以磁性四氧化三铁纳米颗粒（Fe₃O₄ NPs）为载体，通过正硅酸乙酯（TEOS）和3‑氨基丙基三甲氧基硅烷（APTES）对Fe₃O₄ NPs表面氨基化改性；进一步地，以1‑乙基‑3‑(3‑二甲基氨丙基)‑碳化二亚胺（EDC）和N‑羟基琥珀酰亚胺（NHS）为偶联剂，连接α‑突触核蛋白单克隆抗体。利用Fe₃O₄ NPs自身催化活性，以Fe₃O₄ NPs为载体，包附二氧化硅外壳，进而连接α‑突触核蛋白单克隆抗体，合成一种靶向帕金森病，并且可定点清除细胞内ROS，延缓α‑突触核蛋白进一步积聚的检测探针。探针结合靶向、成像及治疗为一体，合成方法简单，所用原料生物安全性高，催化活性较佳、物理稳定性好。

技术领域

本发明涉及一种α-突触核蛋白积聚的检测探针的制备方法及其产品和应用。本发明属于生物检测领域。

背景技术

帕金森病是一种老年人常见的神经系统退行性疾病，其主要临床特征为静止性震颤、行动迟缓、肌强直、姿势步态异常，给患者及家属带来极大的痛苦。帕金森病患者中脑部“黑质”中多巴胺神经元大量变性丢失，伴随神经元胞浆中大量lewy小体生成。研究表明α-突触核蛋白的积聚与lewy小体形成息息相关。α-突触核蛋白是一种140个氨基酸，含量丰富、缺少半胱氨酸和色氨酸残基的脑蛋白。其存在于神经细胞末端，主要负责通过脂质结合进行神经元细胞间的信息交流。在一定条件下，α-突触核蛋白单体间结合形成具有β-折叠的原纤维，进一步积聚形成不可溶的Lewy小体，损害黑质纹状体多巴胺系统。

研究表明alpha-突触核蛋白的积聚与细胞内ROS水平相关。在MPTP建立的帕金森动物模型中，细胞内ROS水平升高，诱导α-突触核蛋白在细胞内积聚，形成原纤维、纤维，进一步折叠形成积聚体；同时原纤维进一步诱导ROS生成，导致神经元细胞死亡。因此，降低细胞内ROS水平，可有效缓解α-突触核蛋白的积聚，在一定程度上减轻对神经元细胞的损伤，达到减轻帕金森病的效果。

目前传统的检测方法主要涉及免疫法（中国发明专利：一种丝氨酸129位磷酸化alpha-突触核蛋白聚集体的ELISA检测方法，公开号：CN20160913085.1；一种检测血红蛋白结合磷酸化alpha-突触核蛋白的方法，公开号：CN201410477919.X; 一种检测血红蛋白结合alpha-突触核蛋白的方法，公开号：CN201410477971.5）。虽然许多研究表明这些检测方法的优良性，但是目前仍缺乏一种方法在有效检测的基础上，可减缓alpha-突触核蛋白的进一步聚集。

磁性纳米颗粒的模拟酶活性得到日益重视，磁性纳米颗粒具有内在的类似于辣根过氧化物酶的活性，可以有效氧化一系列有机底物。然而目前针对磁性纳米颗粒，更多的被用于分离蛋白、DNA及细胞；药物和基因载体；组织工程；磁共振成像；检测及癌症治疗。而利用其模拟酶活性，开发一种集检测及缓解帕金森的探针，具有较高的研究意义和应用价值。

发明内容

本发明目的在于提供一种α-突触核蛋白积聚的检测探针的制备方法，提出在以α-突触核蛋白单克隆抗体为靶向，结合磁性纳米颗粒为载体。

本发明的再一目的在于：提供一种上述方法制备的α-突触核蛋白积聚的检测探针产品。

本发明的又一目的在于：提供一种上述产品的应用。