[发明专利]一种用于癌细胞及H2

摘要

本发明公开了一种用于癌细胞及H2O2检测的纸基传感器的构建方法。开发了一种微流体纸基分析装置（μ‑PAD）上的电化学发光（ECL）细胞传感器，利用原位羟基自由基（•OH）切割DNA方法灵敏检测癌细胞及其释放的H2O2。Ru@SiO2‑Au纳米复合材料中使用了良好的电导体Au纳米粒子，以增强电化学发光信号。此外，AuPd纳米粒子催化细胞内释放的H2O2，产生的•OH切割DNA链I，导致大量修饰在DNA I上的二茂铁分子从工作区域表面离开，使得电化学发光信号明显地降低。所提出的方法证明了电化学发光强度与癌细胞的数量（1.0×102~5.0×108cells/mL）展现出良好的线性关系，同时电化学发光强度与H2O2浓度（200 pmol/L~1μmol/L）也呈良好的线性关系。所提出的纸基电化学发光生物传感器的检测限为30 cell/mL，具有灵敏度高，特异度高，稳定性好等良好的分析性能，对细胞生物学和病理生理学具有潜在的应用价值。

主权项

1.一种用于癌细胞及H2O2检测的纸基传感器的构建，其特征是包括以下步骤：（1）制备的AuPd纳米粒子在纸芯片的工作区域进行修饰；（2）一定浓度的巯基乙胺水溶液滴加到步骤（1）处理得到的工作区域表面，后滴加20 μL氨基化的Ru@SiO2‑Au溶液；（3）9 μL 5 μmol/L二茂铁‑DNA I滴加到步骤（2）修饰的工作区域表面，室温，孵育24 h，用磷酸缓冲盐溶液清洗；（4）10 μL 5.0 mmol/L刀豆球蛋白A水溶液滴加到步骤（3）修饰的工作区域表面，室温，孵育40 min，用磷酸缓冲盐溶液清洗，后滴加10 μL牛血清白蛋白进行细胞非活性位点封闭，室温，孵育2 h；（5）向步骤（4）中得到的纸芯片工作区域滴加10 μL不同浓度梯度的均匀细胞悬液，室温，孵育1 h，用培养缓冲液冲洗，4 ºC下放置，将磷酸盐缓冲溶液和三丙胺混合溶液滴加到上述体系中，测量其电化学发光强度；（6）向步骤（5）体系中加入一定量含有佛波酯的磷酸缓冲盐溶液溶液，测定其电化学发光强度，对比步骤（5）与步骤（6）的电化学发光强度，建立H2O2的浓度和癌细胞的数量与电化学发光强度关系。