[发明专利]一种用于癌细胞及H2

权利要求书

1.一种用于MCF-7癌细胞及H₂O₂检测的纸基传感器的构建，其特征是包括以下步骤：

（1）在制备的纸芯片的工作区域进行AuPd纳米粒子修饰；

（2）一定浓度的巯基乙胺水溶液滴加到步骤（1）处理得到的工作区域表面，后滴加20 μL氨基化的Ru@SiO₂-Au溶液；

（3）9 μL 5 μmol/L二茂铁-DNA I滴加到步骤（2）修饰的工作区域表面，室温，孵育24h，用磷酸缓冲盐溶液清洗；

（4）10 μL 5.0 mmol/L刀豆球蛋白A水溶液滴加到步骤（3）修饰的工作区域表面，室温，孵育40 min，用磷酸缓冲盐溶液清洗，后滴加10 μL牛血清白蛋白进行细胞非活性位点封闭，室温，孵育2 h；

（5）向步骤（4）中得到的纸芯片工作区域滴加10 μL不同浓度梯度的均匀细胞悬液，室温，孵育1 h，用培养缓冲液冲洗，4 ºC下放置，将磷酸盐缓冲溶液和三丙胺混合溶液滴加到上述体系中，测量其电化学发光强度；

（6）向步骤（5）体系中加入一定量含有佛波酯的磷酸缓冲盐溶液，测定其电化学发光强度，对比步骤（5）与步骤（6）的电化学发光强度，建立H₂O₂的浓度和癌细胞的数量与电化学发光强度关系。

2.根据权利要求1所述的一种用于MCF-7癌细胞及H₂O₂检测的纸基传感器的构建，其特征是，纸芯片的制备：利用蜡打印技术在色谱纸上打印圆形图案，将打印蜡的图案放在恒温150 ºC下2 min，未打印蜡的地方为亲水区，三维折纸设备上的疏水屏障形状是由Adobeillustrator CS6软件设计的，折纸装置由一个直径8 mm辅助区印有银/氯化银参比电极、碳对电极和直径8 mm工作区域印有碳工作电极组成，此外，沿宽度1 mm折叠线折叠。

3.根据权利要求1所述的一种用于MCF-7癌细胞及H₂O₂检测的纸基传感器的构建，其特征是，AuPd纳米粒子在纸芯片的工作区域进行修饰的具体步骤如下:将80 mL 0.24 mmol/L氯金酸溶液加热到96 ºC，保持1 min，后加入2.8 mL 34 mmol/L新制的柠檬酸钠，反应10min，颜色变成酒红色，Au种子溶液制备成功，取35 μL Au种子溶液滴加到工作区域的表面，室温，平衡1 h，后用二次纯水清洗，然后，2 mL 20 mmol/L四氯合钯(II)酸水溶液，0.05 mL0.1 mol/L十八烷基三甲基氯化铵溶液和50 μL 1 mmol/L乙酸铜水溶液依次加入到3 mL~5mL 1 mmol/L氯金酸水溶液中，混合均匀，后取50 μL~80 μL上述混合溶液滴加到工作区域的表面，并快速滴加新制备的抗坏血酸水溶液，室温，静置2 h，后在转速9000 rpm下，离心5min，用二次纯水清洗3~4次，工作区域表面形成一层AuPd纳米粒子。

4.根据权利要求1所述的一种用于MCF-7癌细胞及H₂O₂检测的纸基传感器的构建，其特征是，一定浓度的巯基乙胺水溶液滴加到步骤（1）处理得到的工作区域表面的具体步骤如下：80 μL 0.1 mol/L巯基乙胺水溶液滴在修饰有AuPd纳米粒子的工作区域表面，室温，放置2 h，用二次纯水清洗。