[发明专利]柑橘显性功能突变体的制备方法有效
| 申请号： | 201810822742.0 | 申请日： | 2018-07-25 |
| 公开（公告）号： | CN108949819B | 公开（公告）日： | 2020-11-06 |
| 发明（设计）人： | 孔佑涵;李卫东;李先信;吴娟娟;苑平;张平 | 申请（专利权）人： | 湖南省园艺研究所 |
| 主分类号： | C12N15/82 | 分类号： | C12N15/82;C12N15/65;A01H5/00;A01H6/78 |
| 代理公司： | 北京远大卓悦知识产权代理事务所(普通合伙) 11369 | 代理人： | 史霞 |
| 地址： | 410125 湖南*** | 国省代码： | 湖南;43 |
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| 摘要： | 本发明公开了一种柑橘显性功能突变体的制备方法，包括：步骤一、利用第一对引物对，以pCAMBIA1300载体为模板，扩增得到含有转移DNA结构域的载体骨架，之后将第一强启动子基因、报告基因和第二强启动子基因连接入该载体骨架转移DNA结构域的左右两边界之间，构建获得转移DNA结构域含有目标序列的目的载体；步骤二、通过农杆菌介导的转化法将目标序列整合到柑橘幼苗基因组上，筛选得到阳性转化子；步骤三、将阳性转化子培养成植株之后定植在土壤中或嫁接到砧木上保存，得到柑橘显性功能突变体。本发明创制出当代即可利用的柑橘遗传材料，解决了当前无法利用T‑DNA插入方法快速创制出直接可以利用的柑橘突变体的问题。 | ||
| 搜索关键词： | 柑橘 显性 功能 突变体 制备 方法 | ||
【主权项】：
1.一种柑橘显性功能突变体的制备方法，其特征在于，包括如下步骤：步骤一、利用如SEQ ID NO：1和2所示的第一对引物对，以pCAMBIA1300载体为模板，扩增得到含有转移DNA结构域的载体骨架，之后将第一强启动子基因、报告基因和第二强启动子基因均连接入该载体骨架的转移DNA结构域的左右两边界之间，构建获得转移DNA结构域含有目标序列的目的载体，其中，第一强启动子位于报告基因的上游，第二强启动子位于报告基因的下游；步骤二、通过农杆菌介导的转化法将含有目标序列的转移DNA结构域整合到柑橘幼苗基因组上，筛选以得到含有报告基因的阳性转化子；步骤三、将所述阳性转化子培养成植株，之后定植在土壤中或嫁接到砧木上保存，得到柑橘显性功能突变体。
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