[发明专利]一种单细胞测序检测活化T细胞的方法在审
| 申请号： | 201810691767.1 | 申请日： | 2018-06-28 |
| 公开（公告）号： | CN109251961A | 公开（公告）日： | 2019-01-22 |
| 发明（设计）人： | 赵永祥;薛志刚;阳诺;钟莉娉;何坚 | 申请（专利权）人： | 广西医科大学 |
| 主分类号： | C12Q1/6806 | 分类号： | C12Q1/6806 |
| 代理公司： | 北京科亿知识产权代理事务所(普通合伙) 11350 | 代理人： | 韦肖燕 |
| 地址： | 530001 广西壮*** | 国省代码： | 广西;45 |
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| 摘要： | 本发明公开了一种利用单细胞测序检测活化T细胞的方法，包括以下步骤：（1）获取经异源基因杂交细胞诱导扩增的肿瘤特异性细胞毒性T淋巴细胞（cytotoxic lymphocyte,CTL）；（2）分离单细胞并进行裂解；（3）对样品的mRNA进行逆转录得到cDNA；（4）以cDNA为模板进行PCR扩增，产物纯化，进行Tagmentation反应，完成cDNA测序文库构建；（5）对构建的cDNA文库进行高通量测序；（6）测序结果进行生物信息学分析，检测T细胞活化程度。 | ||
| 搜索关键词： | 活化T细胞 测序检测 构建 生物信息学分析 高通量测序 肿瘤特异性 检测T细胞 测序文库 产物纯化 细胞毒性 异源基因 杂交细胞 逆转录 测序 活化 扩增 裂解 诱导 | ||
【主权项】：
1.一种单细胞测序检测活化T细胞的方法，其特征在于：包括以下步骤：1）获取经异源基因杂交细胞诱导扩增的肿瘤特异性CTLs；2）分离单细胞并进行裂解：分离单细胞，加入裂解缓冲液中进行裂解，得到细胞裂解液；3）对样品的mRNA进行逆转录得到cDNA：使用美国ThermoFisher公司的SuperScript试剂盒构建逆转录体系，对上述步骤2）获得的细胞裂解液进行逆转录，得到cDNA；4）以cDNA为模板进行PCR扩增，构建测序文库，进行测序：使用美国Illumina公司的NexteraXT试剂盒，对上述步骤3）得到的逆转录产物进行扩增和纯化，构建高通量测序文库；完成后将文库送交测序；5）对测序结果进行生物信息学分析，检测T细胞的活化程度。
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