[发明专利]一种胸腺五肽分子印迹核壳微球的制备方法

摘要

本发明涉及一种胸腺五肽分子印迹核壳微球的制备方法，以1‑(2‑羟乙基)‑3‑乙烯基咪唑氯([HeVIM]Cl)为功能单体的胸腺五肽分子印迹核壳微球的制备方法，在聚乙二醇双甲基丙烯酸酯(PEGDMA)核球表面，以1‑(2‑羟乙基)‑3‑乙烯基咪唑氯([HeVIM]Cl)为功能单体的胸腺五肽分子印迹核壳微球制备方法。该制备方法针对水溶性的胸腺五肽(TP5)分子，利用具有多种官能团的1‑(2‑羟乙基)‑3‑乙烯基咪唑氯([HeVIM]Cl)离子液体作为功能单体，通过多重协同相互作用和表面印迹法实现了TP5的水相印迹。所制备的印迹核壳微球具有快的吸附速率、较高的吸附容量及印迹效率，解决了生物分子水相印迹的难题。

主权项

1.一种胸腺五肽分子印迹核壳微球的制备方法，其特征在于：以1‑(2‑羟乙基)‑3‑乙烯基咪唑氯([HeVIM]Cl)为功能单体，步骤如下：步骤1：将聚乙烯基吡咯烷酮PVP与的蒸馏水混合，在500～700rpm下搅拌直至PVP全部溶解，得到溶液A；所述溶液A中PVP的浓度为25mg/mL；步骤2：将甲基丙烯酸加到混合溶剂中，再加入偶氮二异丁腈，S,S'‑双(a,a'‑二甲基乙酸)三硫代碳酸酯CAT和乙二醇双甲基丙烯酸酯EGDMA，超声20～30min，得到透明溶液B；所述甲基丙烯酸、偶氮二异丁腈、CAT、EGDMA在溶液B中的浓度分别为0.47mmol/mL、0.013g/mL、0.009g/mL、0.583g/mL；所述混合溶剂为甲醇和三氯甲烷，比例V/V＝1:7～1:8；步骤3：在氮气气氛保护下，用恒压滴液漏斗将溶液B滴加到溶液A中，500～700rpm下搅拌，于50～60℃冷凝回流2h；再将温度上调至70～80℃，反应24h；将所得的产物抽滤，并用甲醇和水的混合溶液洗涤滤出物3‑5次，于40～50℃下真空干燥25～35h，得到聚乙二醇双甲基丙烯酸酯PEGDMA核球；所述甲醇和水的比例V/V＝1:1；步骤4：将PEGDMA核球与磷酸缓冲溶液混合，再依次加入TP5、功能单体[HeVIM]Cl和N,N‑亚甲基双丙烯酰胺MBA，超声分散25～30min，通入氮气10～25min除氧，再加入25μL N,N‑四甲基乙二胺TEMED和45mg过硫酸铵，于45～50℃下聚合反应10h，抽滤，得到核壳微球；所述PEGDMA核球和磷酸缓冲溶液用量为4mg/mL；所述TP5与[HeVIM]Cl的物质的量之比为1:45；[HeVIM]Cl与MBA的物质的量之比为1:1～1:4；所述磷酸缓冲溶液的浓度为0.01mol/L，pH＝9；步骤5：核壳微球用甲醇和乙酸混合溶液振荡洗脱，离心后采用紫外‑可见分光光度计于275.5nm波长处检测上清液中胸腺五肽的吸光度；若吸光度高于0.001，则重复本步骤；若吸光度低于0.001，用去离子水洗涤微球上残留的酸和杂质，抽滤，于40～50℃真空干燥20～30h，得到胸腺五肽分子印迹核壳微球；所述甲醇和乙酸混合溶液的比例V/V＝9:1。