[发明专利]一种基于适配子检测N-羟乙酰神经氨酸含量的方法

摘要

本发明属于分子生物检测技术领域，特别涉及一种基于适配子检测N‑羟乙酰神经氨酸含量的方法，采用N‑羟乙酰神经氨酸‑载体蛋白的偶联物为检测抗原，生物素化修饰的适配子为检测探针，利用包被抗原与检测样品中游离的N‑羟乙酰神经氨酸竞争结合特异性检测探针作为反应模式，经HRP标记的链酶亲和素催化底物显色，测得吸光度值，实现检测样品中N‑羟乙酰神经氨酸的定量测定。本发明检测方法成本低廉，可快速、简便、灵敏地测定尿液、血清及动物源性食品牛奶中的N‑羟乙酰神经氨酸的含量，对肿瘤的诊断、预防、风险评估以及动物源性食品污染领域提供研究素材。

主权项

1.一种基于适配子检测N‑羟乙酰神经氨酸含量的方法，其特征在于，包括如下步骤：S1，准备检测样品，所述检测样品为尿液、血液、牛奶中的其中一种；S2，设计合成适配子，将生物素化后的适配子配制成10μmol/L的适配子溶液，然后用结合液以体积比1：250‑4000稀释，得适配子反应探针溶液，该适配子的核酸序列为：5’‑tggtcccatgtacgccgcggtgtacctccgcgtgtacgctactttctgtgcgtgctgagcgtgaattcgc‑3’；S3，将S1中检测样品加入到抗原预包被处理后的微孔中，以每个微孔中的检测样品为基础样品，然后加入与基础样品等体积量的S2中的适配子反应探针溶液，混匀后37℃孵育1h；S4，用洗涤液洗S3的微孔3‑5次，然后加入相当于S3中基础样品2倍体积量的用结合液稀释了1000倍的HRP标记链酶亲和素，37℃孵育0.5‑1.5h；S5，用洗涤液洗S4的微孔3‑5次，然后加入相当于S3中基础样品2倍体积量的邻苯二胺底物溶液，放置10‑15min，然后加入相当于S3中基础样品等体积量的2mol/L的H2SO4，振荡混匀，得待检溶液；S6，将S5中待检测溶液置于酶标仪上读取492nm波长下的吸光度值数，再对照标准曲线计算得检测样品中N‑羟乙酰神经氨酸含量。