[发明专利]基于磁性生物复合材料与铅离子依赖性DNA酶的电化学生物传感器检测凝血酶的方法

摘要

本发明属于分析检测技术领域，具体涉及一种基于磁性生物复合材料与铅离子依赖性DNA酶的电化学生物传感器检测凝血酶的方法。该方法包括：a)构建磁性生物复合材料Fe3O4@Au‑S1/S2；b)铅离子依赖性DNA酶的酶切辅助；c)电化学生物传感器的构建：向步骤b)得到的反应物中加入亚甲蓝MB，孵育反应得到样品，将样品通过磁性诱导吸附到磁性玻碳电极表面，测定MB的DPV信号，建立标准曲线；d)样品检测：将凝血酶样品，按上述方法检测，测得DPV信号，代入标准曲线得到样品中的凝血酶浓度。本发明能够快速、高灵敏高选择性的检测凝血酶，克服了现有检测方法灵敏度低，检测耗时，成本过高以及步骤繁琐的缺点。

主权项

1.一种基于磁性生物复合材料与铅离子依赖性DNA酶的电化学生物传感器检测凝血酶的方法，其特征在于，包括如下步骤：a)构建磁性生物复合材料Fe3O4@Au‑S1/S2：将修饰有引物链S1的磁性Fe3O4@Au纳米粒与凝血酶适配体S2共孵育；b)铅离子依赖性DNA酶的酶切辅助：向步骤a)构建的复合材料中加入不同浓度的凝血酶，在铅离子依赖性DNA酶S3和铅离子的辅助下共孵育；c)电化学生物传感器的构建：向步骤b)得到的反应物中加入亚甲蓝MB，孵育反应得到样品，将样品通过磁性诱导吸附到磁性玻碳电极表面，测定MB的DPV信号，建立标准曲线；d)样品检测：将未知浓度的凝血酶样品，按上述方法检测，测得DPV信号，代入标准曲线得到样品中的凝血酶浓度；其中，S1为核酸序列，其序列中包含铅离子依赖性DNA酶S3的底物序列以及凝血酶适配体S2的互补配对序列，并且，这两部分存在重叠，从而使得S1与S2互补结合时，S3无法酶切S1上的rA位点。