[发明专利]一种银耳孢子发酵高产银耳多糖的制备方法

摘要

一种银耳孢子发酵高产银耳多糖的制备方法，属于微生物发酵培养技术领域。所述方法如下：菌种：菌株为Tr21；将斜面保藏培养基放置在22.5~23.5℃温度下培养4~8 d，将液体种子培养基灭菌；用10mL生理盐水荡洗斜面保藏培养基上的孢子，按液体种子培养基体积的3~8%接种量接入菌悬液，摇床培养2~4d，转速为170~200r/min，培养温度为23~26℃；将液体发酵培养基在115℃下灭菌，在500mL三角瓶中，装液量100mL，接种量5~8%，接种摇匀静置培养4~8h，在摇床上发酵4~6d，培养温度为23~26℃，搅拌转速为180~220 r/min。本发明优化了银耳多糖的发酵条件，通过添加樟科植物干燥粉末的10~50%水浸提液，促进了发酵液中银耳孢子增殖，生物量增加68.76%~116.87%，胞外多糖产量提高67.75%~99.81%。本发明用于银耳孢子发酵高产银耳多糖。

主权项

1.一种银耳孢子发酵高产银耳多糖的制备方法，其特征在于：所述方法步骤如下：步骤一：采购银耳菌株Tr21；步骤二：配制斜面保藏培养基：取200 g去皮土豆切成小块，加蒸馏水800mL，煮沸20~30 min，纱布过滤后得到滤液，向滤液中加入20g葡萄糖、1g蛋白胨、1g KH2PO4、0.5g MgSO4·7H2O、20g琼脂，加热溶解后补水至总体积为1L，pH自然，在115℃下灭菌20~30 min；步骤三：活化银耳菌种：将步骤一的菌株接种于步骤二的斜面保藏培养基上，于22.5~25.5℃温度下培养4~8 d；步骤四：液体种子培养基配制及培养：1L水中加入20g葡萄糖，2g蛋白胨，1g酵母膏，3g K2HPO4，1.5g MgSO4·7H2O，用1mol/L的HCl或NaOH调节pH值为5.8~6.0，115℃灭菌25~30 min；在无菌操作条件下，用10mL无菌生理盐水荡洗步骤三斜面保藏培养基上的孢子制成菌悬液，按液体种子培养基体积的3~8%接种量接入菌悬液，摇床培养2~4 d，转速为170~200 r/min，培养温度为23~26℃；步骤五：植物浸提液制备：称取过20目筛的植物干燥粉末，按照植物干燥粉末：水=1：10的质量比加水，搅拌均匀，浸提24 h，过滤的滤液即为植物浸提液；步骤六：液体发酵培养基的配制：称取麸皮100~200g，加500mL水，煮沸15~20 min，过滤得到滤液，加入蛋白胨5~7g，葡萄糖10~15 g，可溶性淀粉5~10 g，KH2PO4 4g，MgSO4·7H2O 2g，植物浸提液100~500mL，以水补足1L，溶解后调节pH为5.5~6.0，在115℃下灭菌30 min；步骤七：按步骤六液体发酵培养基体积的4~8%接入步骤四得到的种子液，接种后摇匀静置培养4~8 h，在摇床上发酵4~6 d，培养温度为23~25℃，搅拌转速为180~220 r/min。