[发明专利]一种银耳孢子发酵高产银耳多糖的制备方法

说明书

一种银耳孢子发酵高产银耳多糖的制备方法，属于微生物发酵培养技术领域。所述方法如下：菌种：菌株为Tr21；将斜面保藏培养基放置在22.5~23.5℃温度下培养4~8 d，将液体种子培养基灭菌；用10mL生理盐水荡洗斜面保藏培养基上的孢子，按液体种子培养基体积的3~8%接种量接入菌悬液，摇床培养2~4d，转速为170~200r/min，培养温度为23~26℃；将液体发酵培养基在115℃下灭菌，在500mL三角瓶中，装液量100mL，接种量5~8%，接种摇匀静置培养4~8h，在摇床上发酵4~6d，培养温度为23~26℃，搅拌转速为180~220 r/min。本发明优化了银耳多糖的发酵条件，通过添加樟科植物干燥粉末的10~50%水浸提液，促进了发酵液中银耳孢子增殖，生物量增加68.76%~116.87%，胞外多糖产量提高67.75%~99.81%。本发明用于银耳孢子发酵高产银耳多糖。

技术领域

本发明属于微生物发酵技术领域，具体涉及一种银耳孢子发酵高产银耳多糖的制备方法。

背景技术

银耳（Tremella fuciformis Berk），又称白木耳，为一种高等胶质真菌，是我国久负盛名的滋补营养品和养生益寿的食药用菌。现代药理研究表明银耳具有免疫调节、抗肿瘤和衰老、降血糖血脂、抗血栓和病毒、促进神经细胞生长和防治心血管疾病等生理活性，其活性物质主要是银耳多糖。银耳多糖具有多种的药理和保健功能，被广泛应用于食品、医药及化妆品工业。银耳在不同环境因素下具有酵母孢子型和菌丝型两种形态，呈二型态现象，两种形态均能产生银耳多糖。目前有关银耳孢子多糖和银耳多糖的组成结构和药理功能已有很多报道，它们是一种杂多糖，组成结构相似、功能相当，银耳孢子多糖可替代从银耳子实体提取的多糖用于各类银耳制品。

提取银耳多糖生产上多以银耳子实体（粉）为原料，由于多糖的粘稠性，分离困难，工艺繁杂，资源浪费大且产率较低。银耳在液体培养基中主要以芽孢型存在，通过出芽分裂进行无性繁殖，可采用银耳孢子进行液体深层发酵生产银耳多糖，既能保证活性成分质量，又能进行工业化生产，具有周期短、条件易于控制、成本低、节约资源和人力等优点。目前银耳多糖发酵生产的研究大多数集中在高产银耳孢子多糖菌株选育和对发酵条件的优化，以提高孢子生物量及孢外多糖产量，国内进行银耳菌丝深层发酵提取多糖投资较大，多糖产量不高，尚未规模推广。

发明内容

本发明的目的是为了解决现有的银耳多糖生产方法繁杂、成本高且产率低的问题，提供一种银耳孢子发酵高产银耳多糖的制备方法。

为实现上述目的，本发明采取的技术方案如下：

一种银耳孢子发酵高产银耳多糖的制备方法，所述方法步骤如下：

步骤一：采购银耳菌株Tr21；

步骤二：配制斜面保藏培养基：取200 g去皮土豆切成小块，加蒸馏水800mL，煮沸20~30min，纱布过滤后得到滤液，向滤液中加入20 g葡萄糖、1g蛋白胨、1g KH₂PO₄、0.5 g MgSO₄·7H₂O、20g琼脂，加热溶解后补水至总体积为1L，pH自然，在115℃下灭菌20~30 min；

步骤三：活化银耳菌种：将步骤一的菌株接种于步骤二的斜面保藏培养基上，于22.5~25.5℃温度下培养4~8 d；

步骤四：液体种子培养基配制及培养：1L水中加入20 g葡萄糖，2 g蛋白胨，1 g酵母膏，3 g K₂HPO₄，1.5 g MgSO₄·7H₂O，用1mol/L的HCl或NaOH调节pH值为5.8~6.0，115℃灭菌25~30 min；