[发明专利]一种无损伤提取克氏原螯虾DNA的方法

摘要

本发明公开了一种无损伤提取克氏原螯虾DNA的方法，本发明的具体操作步骤为：1.获取样本：从克氏原螯虾身上获取粘液200ul；2.处理样本：把粘液放入低温离心机离心一分钟，除去上清液；3.裂解细胞：把裂解液和蛋白酶K放入粘液里水浴裂解细胞；4.沉淀蛋白质：把饱和酚和氯仿放入粘液沉淀蛋白质；5.沉淀DNA：加入异丙醇沉淀DNA；6获取DNA：向DNA加水获取DNA。本发明方法可以快速有效的获取克氏原螯虾DNA，本发明提取的DNA质量高，不受蛋白质的污染，可用于分子生物学实验。本发明提取克氏原螯虾DNA不会对克氏原螯虾造成任何伤害，从而为克氏原螯虾的种质资源保护和进行遗传多样性研究提供了一项技术手段，具有重大的科学意义和实用价值。

主权项

1. 一种无损伤提取克氏原螯虾DNA 的方法包括如下步骤：（1）获取样本：取克氏原螯虾刚脱掉的外壳100mg，放入4℃下，防止DNA降解；（2）样本的处理：把外壳放入研钵进行研碎成粉末状，研磨时加入少量液氮，保持外壳一直处于低温状态；（3）裂解细胞：把研磨好的外壳粉末加入0.5ml裂解液和0.03ml蛋白酶K，然后56℃水浴1个小时，裂解细胞，每隔10分钟摇晃一次样品；（4）沉淀蛋白质：把裂解细胞的结果放在低温离心机4℃离心10分钟，转速为5000转/分，把上清液转移到新的离心管内，加入0.5ml饱和酚和0.3ml氯仿， 剧烈摇晃10秒，然后4℃放置10分钟，沉淀蛋白质；（5）沉淀DNA：把沉淀蛋白质的结果放在低温离心机4℃离心10分钟，转速为10000转/分，把上清液转移到新的离心管内，加入零下20℃预冷的1ml异丙醇，剧烈摇晃10秒，4℃放置10分钟，沉淀DNA；（6）洗涤DNA：把沉淀DNA的结果放在低温离心机4℃离心10分钟，转速为10000转/分，把上清液倒掉，留下白色沉淀，加入1ml70%的乙醇洗涤DNA，剧烈摇晃10秒，4℃放置1分钟，洗涤DNA；（7）获取DNA：向洗涤后的DNA加0.3ml水获取DNA。