[发明专利]一种无损伤提取克氏原螯虾DNA的方法有效
| 申请号： | 201810386068.6 | 申请日： | 2018-04-26 |
| 公开（公告）号： | CN108251416B | 公开（公告）日： | 2023-09-15 |
| 发明（设计）人： | 陆超平;马源潮 | 申请（专利权）人： | 海南归耘田农业科技有限公司 |
| 主分类号： | C12N15/10 | 分类号： | C12N15/10 |
| 代理公司： | 北京中建联合知识产权代理事务所(普通合伙) 11004 | 代理人： | 刘湘舟 |
| 地址： | 572000 海南省海口市*** | 国省代码： | 海南;46 |
| 权利要求书： | 查看更多 | 说明书： | 查看更多 |
| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 一种 损伤 提取 克氏原螯虾 dna 方法 | ||
1.一种无损伤提取克氏原螯虾DNA 的方法，包括如下步骤：
（1）获取样本：取克氏原螯虾刚脱掉的外壳100mg，放入4℃下，防止DNA降解；
（2）样本的处理：把外壳放入研钵进行研碎成粉末状，研磨时加入少量液氮，保持外壳一直处于低温状态；
（3）裂解细胞：把研磨好的外壳粉末加入0.5ml裂解液和0.03ml蛋白酶K，然后56℃水浴1个小时，裂解细胞，每隔10分钟摇晃一次样品；
（4）沉淀蛋白质：把裂解细胞的结果放在低温离心机4℃离心10分钟，转速为5000转/分，把上清液转移到新的离心管内，加入0.5ml饱和酚和0.3ml氯仿， 剧烈摇晃10秒，然后4℃放置10分钟，沉淀蛋白质；
（5）沉淀DNA：把沉淀蛋白质的结果放在低温离心机4℃离心10分钟，转速为10000转/分，把上清液转移到新的离心管内，加入零下20℃预冷的1ml异丙醇，剧烈摇晃10秒，4℃放置10分钟，沉淀DNA；
（6）洗涤DNA：把沉淀DNA的结果放在低温离心机4℃离心10分钟，转速为10000转/分，把上清液倒掉，留下白色沉淀，加入1ml70%的乙醇洗涤DNA，剧烈摇晃10秒，4℃放置1分钟，洗涤DNA；
（7）获取DNA：向洗涤后的DNA加0.3ml水；其中，从克氏原螯虾获取外壳时，要刚脱掉的外壳，脱壳时间不能超过半小时，取到外壳后放置在4℃环境中，防止DNA降解。
该专利技术资料仅供研究查看技术是否侵权等信息，商用须获得专利权人授权。该专利全部权利属于海南归耘田农业科技有限公司，未经海南归耘田农业科技有限公司许可，擅自商用是侵权行为。如果您想购买此专利、获得商业授权和技术合作，请联系【客服】
本文链接：http://www.vipzhuanli.com/pat/books/201810386068.6/1.html，转载请声明来源钻瓜专利网。
