[发明专利]霉菌的培养方法、破壁方法及DNA提取方法在审
| 申请号： | 201810300165.9 | 申请日： | 2018-04-04 |
| 公开（公告）号： | CN108676724A | 公开（公告）日： | 2018-10-19 |
| 发明（设计）人： | 李艳;牟德华;文淑婷 | 申请（专利权）人： | 河北科技大学 |
| 主分类号： | C12N1/14 | 分类号： | C12N1/14;C12N1/06;C12N15/10 |
| 代理公司： | 石家庄科诚专利事务所(普通合伙) 13113 | 代理人： | 张红卫;苏兴娟 |
| 地址： | 050000 河北省石家庄市*** | 国省代码： | 河北;13 |
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| 摘要： | 本发明公开了一种霉菌的培养方法、破壁方法，包括①在研磨容器中加入第一CTAB抽提液，将研磨容器进行冷冻，并使第一CTAB抽提液变为冰冻态；②在冷冻之后的研磨容器中加入霉菌及第二CTAB抽提液；以及③对霉菌进行研磨以破坏霉菌的细胞壁，并与第一CTAB抽提液及第二CTAB抽提液形成第一混合溶液等步骤；本发明还公开了一种相应的霉菌DNA的提取方法，包括在第一混合溶液中加入质量体积浓度为10%的SDS溶液，进行温浴，形成第二混合溶液；将第二混合溶液离心，得到第一上清液，第一上清液中含有霉菌的DNA；以及在第一上清液中加入苯酚‑氯仿‑异戊醇抽提液，混匀后离心，得到第二上清液，第二上清液中含有霉菌的DNA。本发明适用于对霉菌进行培养、破壁和DNA提取。 | ||
| 搜索关键词： | 霉菌 抽提液 上清液 混合溶液 研磨容器 破壁 冷冻 细胞壁 混合溶液中 研磨 异戊醇 苯酚 冰冻 混匀 氯仿 温浴 | ||
【主权项】：
1.一种霉菌的培养方法，其特征在于它按照如下的步骤顺序进行：（1）霉菌菌丝的收集将马铃薯洗净、去皮，称取200ɡ切成小块，添加500mL去离子水煮烂之后用八层纱布过滤，于过滤汁中添加16～20ɡ琼脂和20g葡萄糖，冷却后定容至1000mL，加盖密封，115℃灭菌20min后，冷却至50℃后倾倒平板，得马铃薯琼脂培养基；将冷藏于4℃冰箱中的霉菌接种于马铃薯琼脂培养基的平板上，28～30℃恒温培养48h；之后，再转接于新鲜马铃薯琼脂培养基，如此重复2～3次，得活化后的霉菌；（2）活化好的霉菌再次转接于新鲜的马铃薯琼脂培养基上，28～30℃恒温培养48 h后，利用锋利的灭菌刀片刮取平板上的菌丝，得到霉菌菌丝体。
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