[发明专利]一种大肠杆菌冷休克助溶型表达质粒的构建方法及其应用有效
| 申请号： | 201810163346.1 | 申请日： | 2018-02-27 |
| 公开（公告）号： | CN108504670B | 公开（公告）日： | 2022-01-04 |
| 发明（设计）人： | 庞一林;谭国强;吕建新;李江辉;杜璟;张涛;孙倩倩;韩琴霞 | 申请（专利权）人： | 温州医科大学 |
| 主分类号： | C12N15/70 | 分类号： | C12N15/70;C12N9/50;C12N15/54;C12N9/10 |
| 代理公司： | 温州匠心专利代理事务所(特殊普通合伙) 33279 | 代理人： | 胡仁勇 |
| 地址： | 325000 浙江省温州市瓯海*** | 国省代码： | 浙江;33 |
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| 摘要： | 本发明涉及一种大肠杆菌助溶型表达质粒的构建方案及应用其制备水溶性异源多肽的方法。所述利用无缝克隆技术构建一类由冷休克基因的启动子控制小分子泛素相关修饰蛋白(SUMO)与外源基因融合表达的冷休克助溶型表达质粒。将一种嵌合型半胱氨酸脱硫酶克隆至本发明所述质粒，相对公知的pCold I和pET28系列质粒，重组蛋白的水溶性、稳定性及酶活性明显提高。而相对公知的pCold TF质粒，SUMO不会影响目的蛋白空间构象。按Ulp1蛋白酶与重组蛋白为1U:0.5‑1mg的比例，在25℃，酶切1h，SUMO标签的切割效率大于95％，非常适用于生物工程制药业及结构生物学等研究领域制备具有天然N端的蛋白质。 | ||
| 搜索关键词： | 一种 大肠杆菌 休克 助溶型 表达 质粒 构建 方法 及其 应用 | ||
【主权项】：
1.一种外源蛋白在大肠杆菌中可溶性表达的方法，其特征在于：通过构建冷休克助溶型表达质粒提高包涵体在大肠杆菌细胞内的溶解度、活性及稳定性。
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