[发明专利]一种微小型昆虫复眼的透射电镜样品制片方法

摘要

本发明公开了一种微小型昆虫复眼的透射电镜样品制片方法，包括如步骤：S1.虫体清洗；S2.取样；S3.固定、漂洗；S4.再固定、漂洗；S5.脱水、置换；S6.渗透浸样；S7.聚合干燥；S8.定位、切片、捞片烤干；S9.染色、观察。本发明基于现有制样方法，在操作和处理方式上针对微小型昆虫组织特点进行改良。使用该方法制得的样品经透射电镜电镜观察，小眼超微结构清晰完整，无明显缺损、内容物丢失、变形等，说明该法适用于微小型昆虫复眼的透射电镜样品制片，尤其适用于蓟马复眼透射电镜样品的制片。

主权项

1.一种微小型昆虫复眼的透射电镜样品制片方法，其特征在于，包括如下步骤：S1.虫体清洗：挑取活虫样本，常温清洗；S2.取样：在解剖镜下迅速切取虫体头部，获得样品；S3.固定、漂洗：将S2的样品立即完全浸入2.5%戊二醛固定液中，4℃ 固定24～48h，再用0.1M PBS缓冲液漂洗4～6次，每次10～20 min；S4.再固定、漂洗：将S3样品完全浸入1%锇酸，4℃ 2～4h，再用0.1M PBS缓冲液漂洗5次，每次10～20 min；S5.脱水、置换：依次用梯度浓度的酒精冲洗S4的样品，各8～12min，再用100%丙酮冲洗8～12 min；S6.渗透浸样：将S5的样品用丙酮与Epon812树脂不同比例混合物依次渗透浸样（3:1渗透3h，1:1渗透4h，1:3渗透12h），最后用纯树脂渗透2次，每次24h；S7.聚合干燥：将S6的样品转入包埋板中，加入纯树脂包埋并整姿，置于烘箱中依次按以下温度和时间梯度聚合（35℃ 12 h，45℃ 24 h，60℃ 48 h），完成样品处理；S8.定位、切片、捞片烤干：将定位好的样品用超薄切片机和钻石刀进行超薄切片，红外灯下烤干；S9.染色、观察：切片用醋酸双氧铀‑柠檬酸铅染色法染色，将铜网放入透射电子显微镜中进行观察，拍照。