[发明专利]一种微小型昆虫复眼的透射电镜样品制片方法

说明书

本发明公开了一种微小型昆虫复眼的透射电镜样品制片方法，包括如步骤：S1.虫体清洗；S2.取样；S3.固定、漂洗；S4.再固定、漂洗；S5.脱水、置换；S6.渗透浸样；S7.聚合干燥；S8.定位、切片、捞片烤干；S9.染色、观察。本发明基于现有制样方法，在操作和处理方式上针对微小型昆虫组织特点进行改良。使用该方法制得的样品经透射电镜电镜观察，小眼超微结构清晰完整，无明显缺损、内容物丢失、变形等，说明该法适用于微小型昆虫复眼的透射电镜样品制片，尤其适用于蓟马复眼透射电镜样品的制片。

技术领域

本发明涉及生物样品制备技术领域，更具体地，涉及一种微小型昆虫复眼的透射电镜样品制片方法。

背景技术

蓟马是缨翅目（Thysanotpera）昆虫的统称，体长约0.5～5 mm，属于微小型昆虫，根据食性可以分为菌食性、捕食性、植食性三类。许多植食性蓟马都是重要的农林类害虫，比如西花蓟马、普通大蓟马、花蓟马、稻蓟马等。蓟马类害虫为害猖獗，由于其体型微小，隐蔽性强，繁殖力极强，喷施杀虫剂的常规化学防治方法无法达到好的防效，反而使许多地区的蓟马种群产生了不同程度的抗药性，并且造成严重的污染和食物残留问题。因此，环境友好的物理防治日益受研究者们关注。对害虫的物理防治措施一般从昆虫趋性入手，除了行为学研究，从虫体感觉器官入手解读昆虫感受机制是深入研究不可缺少的环节。复眼是昆虫重要的感光器官，是昆虫趋光行为、趋色行为的生理结构基础。明确昆虫复眼结构，从而了解复眼实现其功能的运作机制是研究昆虫趋光性、趋色性的基本要求。

国内对蓟马复眼结构的研究较少，对复眼外部结构的观察主要运用扫描电镜技术，对小眼的内部基础结构则主要通过光学显微镜观察石蜡切片实现。研究表明，蓟马的复眼为并列像眼，小眼的一般结构自外向内由角膜、晶锥、视杆、基膜组成。目前研究最为深入的是西花蓟马，研究者运用扫描电镜技术明确了西花蓟马复眼外部结构，而内部结构研究止步于使用光学显微镜观察石蜡切片明确小眼显微结构。尚未有运用透射电镜技术研究蓟马复眼超微结构的报道，亦没有针对蓟马复眼的透射电镜样品制片方法的报道。

昆虫复眼由一系列视觉细胞特化而成，内部与视神经相连，是非常精密的结构。复眼最外侧是角膜细胞分泌形成的角膜，由多层平行的片状纤维结构组成。由于没有昆虫体壁保护，复眼组织相对比较脆弱，但在制片时固定液更容易渗透。对复眼形态和内部结构的固定、内容物的保存是制作复眼的透射电镜样品时应考虑的首要因素。现有的昆虫复眼透射电镜样品制片方法主要针对体型适中的鳞翅目、直翅目、半翅目等昆虫，直接取用昆虫复眼进行制片，操作中主要使用尖头镊子和解剖剪。而蓟马等微小型昆虫复眼极小，直接取复眼进行制片难度极大，并且样品过于微小，操作时很容易丢失样品或是对组织结构造成损伤，不适用于蓟马等微小型昆虫复眼透射电镜样品的制片。

对此，本发明提出一种经检验有效的复眼透射电镜样品的制片方法，可运用于微小型昆虫，尤其是蓟马的复眼透射电镜样品的制片。

发明内容

本发明所要解决的技术问题是克服现有昆虫复眼透射电镜样品制片方法无法适用于微小型昆虫的缺陷和不足，提出一种微小型昆虫复眼的透射电镜样品制片方法，尤其是一种蓟马复眼的透射电镜样品制片方法。本方法在现有的昆虫复眼及触角透射电镜样品制片方法的技术上做了针对性改良，使操作方法、处理方式更加适合微小型昆虫复眼样品的制片，尤其更加适合蓟马复眼样品的制片。

本发明的目的是提供一种微小型昆虫复眼的透射电镜样品制片方法。

本发明的上述目的是通过以下技术方案给予实现的：

一种微小型昆虫复眼的透射电镜样品制片方法，包括如下步骤：

S1.虫体清洗：挑取活虫样本，常温清洗；

S2.取样：在解剖镜下迅速切取虫体头部，获得样品；