[发明专利]猪A型产气荚膜梭菌灭活疫苗的快速高效制备方法

摘要

本发明属于兽用生物制品技术领域，涉及一种猪A型产气荚膜梭菌灭活疫苗的快速高效制备方法。包括以下步骤：挑取A型产气荚膜梭菌致死病猪的病料，刮取肠道内容物，冷藏或冷冻；将培养基在高压锅内高压灭菌，待到温度降低后，把病料倒入高压锅内，厌氧培养，传代3次；取三次传代的菌液接入肉肝胃膜消化汤培养，培养结束后离心，取上清液；向上清液加入灭活剂，充分振摇，灭活脱毒，得灭活菌液；将灭活菌液与佐剂混合，得灭活疫苗。本发明提供的方法工艺简单、成本低、污染小，制备出的灭活疫苗安全性高，注射后无不良反应，免疫效力高、免疫期长。

主权项

1.一种猪A型产气荚膜梭菌灭活疫苗的快速高效制备方法，其特征在于，步骤为：(1)病原菌的获取：挑取A型产气荚膜梭菌致死病猪的病料，刮取肠道内容物，冷藏或冷冻；(2)菌种培养：将培养基在高压锅内高压灭菌，待到温度降低后，把病料倒入高压锅内，厌氧培养，传代3次，其中培养基是纯牛奶和葡萄糖的合成培养基；(3)菌液制备：取步骤(2)中三次传代的菌液接入肉肝胃膜消化汤培养，培养结束后离心，取上清液；(4)菌液灭活：向步骤(3)的菌液加入质量分数为0.2％的二乙烯亚胺溶液使其最终质量分数为0.02‑0.05％，将混合液在20‑30℃震荡灭活20‑24h，后加入β‑丙内酯使其终浓度为1g/L，在37℃震荡灭活2h，加入1mol/L的无菌硫代硫酸钠溶液，使其终浓度与二乙烯亚胺一致，终止灭活1h，得灭活菌液；(5)疫苗制备：将灭活菌液与佐剂混合，得灭活疫苗；其中，灭活菌液与佐剂的体积比为1：(2‑4)；所述佐剂为免疫刺激复合物；所述免疫刺激复合物的制备包括以下步骤：S1：脂类混合物溶液的配制：将卵磷脂和胆固醇加至20％Mega‑10中，使两者终浓度都为10mg/mL；S2：皂苷溶液的配制：将QS‑21溶解于pH为7.2的PBS溶液中，调整浓度为10‑15mg/mL；S3：免疫刺激复合物制备：将脂类混合物溶液和皂苷溶液按体积比为1:(3‑5)充分混合室温下裂解5‑7h；冰浴超声处理，透析，过0.22μm滤膜除菌后于4℃保存备用。