[发明专利]一种特异性靶向变异链球菌gtfB位点的CRISPR-B基因编辑方法及应用有效
| 申请号： | 201810043682.2 | 申请日： | 2018-01-17 |
| 公开（公告）号： | CN108085317B | 公开（公告）日： | 2019-06-21 |
| 发明（设计）人： | 李雨庆;龚涛;彭显;王诗达;周学东 | 申请（专利权）人： | 四川大学 |
| 主分类号： | C12N15/113 | 分类号： | C12N15/113;C12N15/90;C12N1/21;C12R1/46 |
| 代理公司： | 成都信博专利代理有限责任公司 51200 | 代理人： | 王沙沙 |
| 地址： | 610041 四川省成都市*** | 国省代码： | 四川;51 |
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| 摘要： | 本发明公开了一种特异性靶向变异链球菌gtfB位点的CRISPR‑B基因编辑方法及应用，基因序列如SEQ ID NO.1所示；基因编辑方法包括以下步骤：步骤1：在基因序列前连接乳酸脱氢酶启动子Ldhp，形成Ldhp+CRISPR‑B；步骤2：通过酶切和连接将Ldhp+CRISPR‑B连接到线性质粒pDL278，形成CRISPR编辑载体；步骤3：通过聚合酶链式反应扩增敲除目的基因gtfB上游序列作为upstream；步骤4：通过聚合酶链式反应扩增敲除目的基因gtfC下游序列作为downstream；步骤5：将步骤3得到的upstream和步骤4得到的downstream连接形成同源重组模板HR‑BC；步骤6：将步骤2得到的CRISPR编辑载体和步骤5得到的同源重组模板HR‑BC转入变异链球菌中，即可实现同时编辑gtfB和gtfC；本发明可最大程度抑制变异链球菌胞外多糖的合成和生物膜的形成。 | ||
| 搜索关键词： | 变异链球菌 聚合酶链式反应 基因序列 目的基因 同源重组 种特异性 靶向 扩增 敲除 位点 乳酸脱氢酶 胞外多糖 上游序列 下游序列 线性质粒 基因 启动子 生物膜 酶切 应用 合成 转入 | ||
【主权项】：
1.一种特异性靶向变异链球菌gtfB位点的CRISPR基因序列，其特征在于，所述基因序列如SEQ ID NO.1所示，记为CRISPR‑B基因序列。
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