[发明专利]测定甜高粱茎杆干样可溶性糖含量的方法

摘要

本发明提供一种测定甜高粱茎杆干样可溶性糖含量的方法，步骤包括：试剂的配置；样品测定；利用比色法测定化合物的吸光值判断甜高粱茎杆的含糖量。苯酚硫酸法测定可溶性总糖方法简单，试剂便宜，所用实验仪器较少，灵敏度较高，实验过程中基本不受蛋白质存在的影响，并且产生的颜色可稳定3h左右，便于试验操作。

主权项

1.一种测定甜高粱茎杆干样可溶性糖含量的方法，其特征在于，包括以下步骤：一、试剂的配置A、9g/ml苯酚溶液：将苯酚晶体，密度1.017g/ml，于60℃水浴锅溶解，取88.496ml苯酚液体加入含有10ml蒸馏水的容量瓶中；B、10mg/ml蔗糖标准液：称取蔗糖1g，于100ml容量瓶内，加5ml蒸馏水预溶后，缓慢加入0.25ml浓硫酸，立即充分摇匀，室温放置30s，继续缓慢加入0.25ml浓硫酸，立即充分摇匀，室温放置1min，用蒸馏水定容100ml；C、100μg/ml蔗糖溶液：吸取10mg/ml的蔗糖标准液1ml，定容至100ml；二、样品测定A、标准曲线制作：A1底物反应液准备：准备20ml刻度试管7支，依次编号：0‑7，其中0号为对照管)，1‑6号为样品管，按下表配置测试样，总体积2ml：A2反应液配置：依次在7支试管加入9g/ml苯酚溶液1ml，充分混匀后，分别向7支试管依次迅速加入5ml浓硫酸，时间间隔10s以内；A3样品测定：反应液室温下放置30min，485nm波长下测定吸光度，绘制标准曲线，求出标准直线方程；B、甜高粱茎杆干样可溶性糖测定B1样品处理取甜高粱一个茎杆，烘干至恒重；利用植物样品粉碎机将茎杆干样粉碎，50目过筛后装于塑料袋中备用；B2可溶性总糖的提取称取甜高粱茎杆粉末3份，分别置于三支刻度试管中，0.3g/份，三支刻度试管中分别加入8ml蒸馏水，软木塞封口，于沸水中煮30min提取总糖，滤纸过滤提取液至25ml容量瓶中，继续漂洗试管2‑3次，定容，备用；B3测定①吸取以上提取液0.5ml至3个刻度试管中，分别加蒸馏水1.5ml后；②迅速加入9g/ml的苯酚溶液1ml，立即摇晃混匀，置于试管架上20s；③缓慢加入5ml浓硫酸，立即轻微摇晃混匀，防止液体飞溅；④4℃冰箱内放置10mim，显色，⑤485nm波长，测定吸光度，根据标准曲线，求得含糖量；三、结果计算按下式计算样品的糖含量式中，m：从标准曲线查得的糖含量，单位μg；Vt为提取液体积，单位ml；Vs为测定时取用的样品体积，单位ml；N为稀释倍数；m0为样品质量。