[发明专利]一种非诊断目的的鸡白痢和鸡伤寒沙门氏菌的定量检测方法

摘要

本发明公开了一种非诊断目的的鸡白痢和鸡伤寒沙门氏菌的快速检测方法。本发明的检测方法首先制备标记有鸡白痢沙门氏菌和鸡伤寒沙门氏菌抗体的偶联纳米磁珠(IgG‑MNPs)和抗体及酶双标记的二氧化硅纳米微球(GOx‑IgG‑SiNPs)，当存在待测目的菌时，形成夹心“三明治”结构的免疫复合物IgG‑MNPs/S.pullorum and S.gallinarum GOx‑IgG‑SiNPs，然后经过酶催化反应，反应产物与显色剂形成络合产物，最后通过检测体系的吸光度值获得鸡白痢和鸡伤寒沙门氏菌的浓度，从而实现了鸡白痢沙门氏菌和鸡伤寒沙门氏菌的定量检测。本发明以葡萄糖氧化酶(GOx)触发的级联反应结合Fe3+‑SCN‑显色系统实现了鸡白痢沙门氏菌和鸡伤寒沙门氏菌的定量检测，该检测方法方便快捷，易操作，具有良好的灵敏度、特异性和稳定性。

主权项

1.一种非诊断目的的鸡白痢和鸡伤寒沙门氏菌的定量检测方法，其特征在于，包括以下步骤：(1)将鸡白痢和鸡伤寒沙门氏菌抗体和葡萄糖氧化酶共价结合到二氧化硅纳米微球的表面，形成酶标记物，备用；(2)用鸡白痢和鸡伤寒沙门氏菌抗体对Fe3O4/SiO2核壳结构的磁性纳米颗粒表面进行修饰，得到抗体偶联纳米磁珠，备用；(3)将步骤(2)制备得到的抗体偶联纳米磁珠加入到待测样品悬浮液中于37℃孵育一定时间，经洗涤、磁性分离，得到具有磁性的免疫复合物A；(4)在步骤(3)制备得到的免疫复合物中加入步骤(1)制备得到的酶标记物并于37℃孵育一定时间，经洗涤、磁性分离，得到具有磁性的免疫复合物B；(5)在步骤(4)得到的免疫复合物B中加入葡萄糖进行酶催化反应；(6)酶催化反应完成后，加入显色试剂KSCN溶液，利用酶标仪测定样品在波长466nm处的吸光度值，根据吸光度值为纵坐标，鸡白痢和鸡伤寒沙门氏菌浓度的对数值为横坐标的标准曲线，能够计算得到鸡白痢和鸡伤寒沙门氏菌含量。