[发明专利]核酸序列测定方法

摘要

提供了使用受损DNA聚合酶检测同源核苷酸的结合测序方法，所述受损DNA聚合酶具有以模板依赖性方式结合引物下游的下一个正确核苷酸的能力，但不具有促进磷酸二酯键形成所需的活性。受损DNA聚合酶的使用允许每次询问一个核苷酸，而不掺入任何核苷酸。标记的核苷酸，如荧光标记的核苷酸，可联合所述受损DNA聚合酶使用以便以快速方式测定同源核苷酸同一性。

主权项

1.一种确定测试核苷酸是否是下一个正确的核苷酸的方法，所述下一个正确的核苷酸包含与紧邻引物模板核酸中的引物下游的模板链中的下一个碱基互补的碱基，所述方法包括以下步骤：(a)使所述引物模板核酸与包含受损DNA聚合酶和所述测试核苷酸的第一反应混合物接触，从而如果所述测试核苷酸是下一个正确的核苷酸，那么形成包含所述引物模板核酸、所述受损DNA聚合酶和所述测试核苷酸的复合物，且其中所述受损DNA聚合酶大体上不能实现镁催化的磷酸二酯键形成；(b)测量在所述测试核苷酸存在下所述引物模板核酸与所述受损DNA聚合酶的结合，而所述测试核苷酸不会化学掺入到所述引物模板核酸的引物中；以及(c)由步骤(b)的结果确定所述测试核苷酸是否是下一个正确的核苷酸。