[发明专利]一种通过共振瑞利散射法准确测定壳寡糖含量的方法

摘要

本发明涉及一种通过共振瑞利散射法准确测定壳寡糖含量的方法，属于大分子检测领域。本发明利用一定条件下，壳寡糖能与宝石红结合形成离子缔合物，使共振散射强度显著增强，加入十二烷基硫酸钠作为增敏剂提高其灵敏度。通过共振散射强度与壳寡糖在一定的浓度范围内呈线性关系，以此作为壳寡糖的定量基础，建立了测定壳寡糖的共振瑞利散射法。本方法测定受离子浓度和干扰物的影响，在实际样品测定中，需控制离子浓度在0.05mol/L‑0.20mol/L的标准品做定量标准，具有试剂廉价，灵敏度高，重现性好和操作简便等优点。

主权项

1.一种通过共振瑞利散射法准确测定壳寡糖含量的方法，其包括下述步骤：1)绘制△I和不同浓度的壳寡糖的标准曲线向10mL比色管中加入1.0mL的B-R缓冲溶液，一定浓度梯度的壳寡糖标准溶液，1.0mL浓度为0.086mol/L的增敏剂，以及1.0mL浓度为1.0×10-4mol/L的宝石红溶液，使用蒸馏水定容后充分摇匀，将其置于室温10min后于F-2500型荧光分光光度计上，以λex＝λem进行同步扫描，分别记录含壳寡糖的各检测体系在λ＝470nm处体系的共振散射强度I，其中试剂空白在λ＝470nm处体系的共振散射强度I0，并计算△I＝I-I0，建立△I与壳寡糖浓度的标准曲线C；2)10μg/mL的样品工作液的制备：将壳寡糖胶囊去胶囊壳，称取0.04g于100mL容量瓶中，用0.5mol/L冰醋酸溶解，定容得样品储备液。用漏斗脱脂棉过滤储备液，滤液经6000r/min，离心机离心20min，取上清液2.5mL于100mL容量瓶，定容，得浓度为10μg/mL的样品工作液。3)样品中壳寡糖含量确定：取样品工作液1mL，按步骤1)检测方法进行测定，在470nm处测定其散射值I，并计算△I＝I–I0，将△I代入线性回归方程求得样品中壳寡糖的含量，同时做加标回收试验。