[发明专利]一种通过共振瑞利散射法准确测定壳寡糖含量的方法

权利要求书

1.一种通过共振瑞利散射法准确测定壳寡糖含量的方法，其特征在于，包括下述步骤：

1)绘制△I和不同浓度的壳寡糖的标准曲线向10mL比色管中加入1.0mL的B-R缓冲溶液，一定浓度梯度的壳寡糖标准溶液，1.0mL浓度为0.086mol/L的增敏剂，以及1.0mL浓度为1.0×10^-4mol/L的宝石红溶液，使用蒸馏水定容后充分摇匀，将其置于室温10min后于F-2500型荧光分光光度计上，以λ_ex＝λ_em进行同步扫描，分别记录含壳寡糖的各检测体系在λ＝470nm处体系的共振散射强度I，其中试剂空白在λ＝470nm处体系的共振散射强度I0，并计算△I＝I-I₀，建立△I与壳寡糖浓度的标准曲线C；

2)10μg/mL的样品工作液的制备：将壳寡糖胶囊去胶囊壳，称取0.04g于100mL容量瓶中，用0.5mol/L冰醋酸溶解，定容得样品储备液， 用漏斗脱脂棉过滤储备液，滤液经6000r/min，离心机离心20min，取上清液2.5mL于100mL容量瓶，定容，得浓度为10μg/mL的样品工作液；

3)样品中壳寡糖含量确定：取样品工作液1mL，按步骤1)检测方法进行测定，在470nm处测定其散射值I，并计算△I＝I–I₀，将△I代入线性回归方程求得样品中壳寡糖的含量，同时做加标回收试验；

所述B-R缓冲溶液由0.04mol/L混合酸与0.2mol/LNaOH溶液按不同比例配制而成；所述混合酸由正磷酸、冰乙酸和硼酸按不同比例配制而成；所述的B-R缓冲溶液的pH为4.9；所述增敏剂为十二烷基硫酸钠；步骤1中溶液的加入顺序为首先加入宝石红溶液，其次加入十二烷基硫酸钠溶液，再次加入RB缓冲溶液，最后加入壳寡糖溶液；所述壳寡糖的浓度范围0.5μg/mL-2.5μg/mL。