[发明专利]一种澳洲鸽石斛优质种苗无性克隆快速繁殖方法

摘要

本发明公开了一种澳洲鸽石斛优质种苗无性克隆快速繁殖方法。本发明以澳洲鸽石斛当年新萌发生长的嫩芽为外植体，经过类原球茎诱导培养、类原球茎增殖培养、类原球茎分化培养、生根壮苗培养和出瓶移栽，实现澳洲鸽石斛优质种苗的快速繁殖。本发明的方法具有可定时、定质、定量提供规格划一整齐一致的优质澳洲鸽石斛试管苗满足市场需求，试管苗无病虫生长健壮，种苗具有品质好、抗性强、生长迅速、便于生产管理和降低生产成本等优势。可为国内发展澳洲鸽石斛产业提供大量优质标准的种苗，对促进澳洲鸽石斛产业在我国的发展，尽早形成规模化生产，抢先进入全国花卉市场，具有积极的推动作用。

主权项

一种澳洲鸽石斛优质种苗无性克隆快速繁殖方法，其特征在于，包括以下步骤：a、外植体的消毒：选取澳洲鸽石斛优良单株当年新萌发生长的嫩芽为外植体，去除叶片并将其切成包含芽点的小段后进行消毒处理，剥去苞叶后再进行消毒处理，得到消毒后的嫩芽；b、类原球茎诱导培养：切取消毒后的嫩芽上带节的茎段和顶芽，接种到类原球茎诱导培养基SB1，培养温度为(25±2)℃，光照度1500～2000lx，光照时间12h/d，待茎段节位和顶芽基部节位有腋芽产生、外植体基部切口膨大形成颗粒突起时转接到新的类原球茎诱导培养基SB1，培养温度为(25±2)℃，光照度1500～2000lx，光照时间12h/d，获得类原球茎；所述的类原球茎诱导培养基SB1：每升含花宝1号1～2g、花宝2号1～2g、硫酸亚铁20～40mg、乙二胺四乙酸二钠20～40mg、蛋白胨0.5～2g、椰子汁50～100mL、肌醇80～120mg、甘氨酸1.5～2.5mg、盐酸硫胺素0.05～0.2mg、盐酸吡哆醇0.4～0.8mg、烟酸0.4～0.8mg、6‑苄基嘌呤5.0～8.0mg、萘乙酸0.2～2mg、蔗糖15～30g和琼脂6～7g，pH 5.4‑5.6；c、类原球茎增殖培养：将获得的类原球茎转接至增殖培养基SB2，培养温度为(25±2)℃，光照度1500～2000lx，光照时间12h/d，增殖培养得到的类原球茎可用于类原球茎分化培养或者继续增殖培养；所述的增殖培养基SB2：每升含花宝1号1～2g、花宝2号1～2g、硫酸亚铁20～40mg、乙二胺四乙酸二钠20～40mg、蛋白胨0.5～2g、土豆泥40～80g、肌醇80～120mg、甘氨酸1.5～2.5mg、盐酸硫胺素0.05～0.2mg、盐酸吡哆醇0.4～0.8mg、烟酸0.4～0.8mg、6‑苄基嘌呤2.0～5.0mg、萘乙酸0.2～0.5mg、蔗糖15～30g和琼脂6～7g，pH 5.4‑5.6；d、类原球茎分化培养：将获得的类原球茎转接至分化培养基SB3，培养温度为(27±2)℃，光照度2000～3000lx，光照时间12h/d，类原球茎分化形成不定芽；所述的分化培养基SB3：每升含花宝1号1～2g、花宝2号1～2g、硫酸亚铁20～40mg、乙二胺四乙酸二钠20～40mg、蛋白胨0.5～2g、土豆泥40～80g、活性炭50～100mg、肌醇80～120mg、甘氨酸1.5～2.5mg、盐酸硫胺素0.05～0.2mg、盐酸吡哆醇0.4～0.8mg、烟酸0.4～0.8mg、6‑苄基嘌呤3.0～6.0mg、萘乙酸0.2～0.5mg、蔗糖15～30g和琼脂6～7g，pH 5.4‑5.6；e、生根壮苗培养：当类原球茎分化培养的不定芽高3～5cm时，转接至生根壮苗培养基SR4，培养温度为(27±2)℃，光照度2000～3000lx，光照时间12h/d，获得试管苗；所述的生根壮苗培养基SR4：每升含花宝1号1～2g、花宝2号1～2g、硫酸亚铁20～40mg、乙二胺四乙酸二钠20～40mg、蛋白胨0.5～2g、土豆泥40～80g、活性炭500～1000mg、肌醇80～120mg、甘氨酸1.5～2.5mg、盐酸硫胺素0.05～0.2mg、盐酸吡哆醇0.4～0.8mg、烟酸0.4～0.8mg、萘乙酸0.2～0.5mg、蔗糖15～30g和琼脂6～7g，pH 5.4‑5.6；f、出瓶移栽：当生根壮苗培养得到的试管苗长至5～7cm高时在自然光下炼苗，取出试管苗，洗净附着的培养基后，对试管苗根部进行消毒处理，然后移栽至种植基质中，置于阴凉通风处栽培，浇水保湿，其他按常规条件培养，由此得到澳洲鸽石斛幼苗。